原理和應(yīng)用：
Ettan DIGE熒光差異蛋白表達分析系統(tǒng)在傳統(tǒng)雙向電泳技術(shù)的基礎(chǔ)上，結(jié)合了多重熒光分析的方法，在同一塊膠上共同分離多個分別由不同熒光標記的樣品，并第一次引入了內(nèi)標的概念，極大地提高了結(jié)果的準確性，可靠性和重復(fù)性。在DIGE技術(shù)中，每個蛋白點都有它自己的內(nèi)標，并且軟件全自動根據(jù)每個蛋白點的內(nèi)標對其表達量進行校準，保證所檢測到的蛋白豐度變化是真實的。DIGE技術(shù)可檢測到樣品間小于10%的蛋白表達差異，統(tǒng)計學(xué)可信度達到95%以上。利用Ettan DIGE技術(shù)還可以對微量（少到5μg）樣本進行蛋白質(zhì)組學(xué)分析，例如激光捕獲顯微切割（LCM）得到的樣品或者很難獲得的珍貴樣品等。
Ettan DIGE系統(tǒng)包括CyDye DIGE熒光標記物，IPGphor II/Ettan DALT電泳系統(tǒng)，Typhoon多功能激光共聚焦掃描儀和DeCyder差異分析軟件。CyDye DIGE熒光標記物專門為Ettan DIGE系統(tǒng)設(shè)計，這些熒光標記物是分子量和電荷匹配的，具有信號強，光譜分開，吸收和發(fā)射峰窄等特點。這些特點使不同的CyDye（Cy2, Cy3, Cy5）標記的樣品可以在同一塊膠上共分離，保證所有樣品在完全相同的第一向和第二向電泳條件下分離，消除實驗的偏差并保證精確的膠內(nèi)匹配。利用IPGphor II進行第一向分離和Ettan DALT垂直電泳儀進行第二向分離，在一塊2-D膠上同時分離多達3個樣品。Typhoon的光學(xué)系統(tǒng)經(jīng)過優(yōu)化，在Ettan DIGE系統(tǒng)的CyDye DIGE熒光標記蛋白成像中能達到高靈敏度，并且其控制軟件經(jīng)過優(yōu)化設(shè)計采集Ettan DIGE圖像。全自動多色熒光掃描功能可以一次檢測多個樣品并做到四色熒光一次成像，既保證了分析準確性又提高了通量。另外，Typhoon除了能檢測范圍廣泛的熒光素外，還有經(jīng)過驗證的磷屏同位素檢測和直接化學(xué)發(fā)光成像功能。特別開發(fā)的軟件DeCyder完全自動化進行DIGE結(jié)果的多重樣品間的差異比較，并通過內(nèi)標對每個蛋白點和每個差異進行統(tǒng)計學(xué)分析。該軟件全自動定位和分析在一塊膠中的多重樣品，并進行多塊膠之間的比較分析，得到精確的蛋白豐度差異變化的計算結(jié)果。利用DeCyder軟件可以得到統(tǒng)計學(xué)可信的結(jié)果，極大降低操作者之間的偏差，并且將手工操作時間減少到幾分鐘。
采用DIGE技術(shù)，通過對不同類型，不同個體的細胞、組織、或經(jīng)過不同處理和不同生長條件下蛋白質(zhì)表達差異分析，在研究疾病的分子機理、分子診斷、藥物作用機理、毒理學(xué)等方面都有廣泛的應(yīng)用。尤其是通過對各種疾病組織和正常組織進行比較，可以得到針對特定疾�。ɡ缒[瘤）的一些標記蛋白質(zhì)，得到的這些蛋白質(zhì)可以用來作為疾病分子診斷的標記，或為進一步的疾病治療以及藥物開發(fā)提供有價值的信息。
Ettan DIGE是目前蛋白質(zhì)組學(xué)研究中可信度和準確率最高的技術(shù)之一，是已經(jīng)經(jīng)過驗證并且被許多著名的蛋白質(zhì)組學(xué)研究部門肯定的技術(shù)。Ettan DIGE技術(shù)已經(jīng)在各種樣品中得到應(yīng)用，包括人、大鼠、小鼠、真菌、細菌等，主要用于功能蛋白質(zhì)組學(xué)，如各種腫瘤研究，尋找疾病分子標志物，揭示藥物作用的分子機制或毒理學(xué)研究等方面。
