siRNA制備方法比較

比較項目

化學(xué)合成

體外轉(zhuǎn)錄

RNase III降解dsRNA

siRNA
表達載體

PCR
表達框

材料需求

21-mer RNA
oligos(一對)

29-mer DNA oligos(一對)

轉(zhuǎn)錄模版 (200-1000bp，兩側(cè)帶T7 啟動子)

55-60-mer DNA oligos(一對)

~50-mer DNA oligos(一對)

全部制備/合成時間所需時間

4天—2周

24 小時 DNA oligo合成時間

1 天 轉(zhuǎn)錄模版制備時間

5天以上 DNA oligo合成時間

~ 6 小時 DNA oligo合成時間

個人所需操作時間

幾乎不需要*

中等

中等

多

中等

是否需要驗證和尋找最有效siRNA

需要

需要

不需要

需要

需要

能否標(biāo)記siRNA (例如用于熒光顯微鏡分析siRNA進入細胞過程或者在細胞中的定位）

能

能

能

不能

不能

轉(zhuǎn)染的相對難易程度

好

好

好

差

差

可篩選性 (例如抗生素篩選)

不可以

不可以

不可以

可以

不可以

能否用于長效抑制

不可以

不可以

不可以

可以（抗生素篩選）

不可以

能否大規(guī)模制備

可以

有限

有限

可以

有限

檢測總體轉(zhuǎn)染效率

不可以

不可以

不可以

可以

不可以

每個基因的相對費用（不包含人力）

高

中等

低

中等

中等

*取決于合成后是否包含純化、去保護，以及廠家提供的是已經(jīng)退火的即用型雙鏈還是凍干的單鏈