酶促生物素標記cRNA探針的應用

     酶促生物素標記cRNA探針基本方法和放射性標記cRNA探針同，所不同的是探針濃度為2.5μg/μl。顯示探針反應步驟如下。
　�。�1）用PBS沖洗粘附有切片的載片2×3min。根據情況也可用漂洗法。
　�。�2）將載片浸入0.3%H2O2在PBS或甲醇內30min以封閉內源性過氧化物酶。
　�。�3）PBS沖洗2×3min，用吸水紙拭干切片周圍的水份，加入小鼠抗生物素血清1：100和PBS含正常羊血清（1：30），室溫1h，或4℃過夜。
　�。�4）PBS徹底沖洗。
　　（5）載片加生物素化抗小鼠IgG（1：100）30min室溫。
　�。�6）PBS徹底沖洗。
　�。�7）應用ABC復合物與等量的1%牛血清白蛋白-PBS液混合孵育1h，室溫。
　　（8）PBS徹底沖洗。
　　（9）將切片覆以新鮮配制的0.025贐溶液，0.02%H2O2,孵育3～15min。
　　（10）水洗，復染，脫水，透明和以甘油/PBS或DPX封固。如需要可用銀染，多層ABC或PAP法加強染色效果。