1.儀器裝置 電泳室及直流電源同紙電泳。
2.試劑
(1) 巴比妥緩沖液(pH8.6) 取巴比妥2.76g，巴比妥鈉15.45g，加水溶解使成1000ml。
(2) 氨基黑染色液 取0.5g的氨基黑10B,溶于甲醇50ml、冰醋酸10ml及水40ml的混合液中。
(3) 漂洗液 取乙醇45ml、冰醋酸5ml及水50ml，混勻。
(4) 透明液 取冰醋酸25ml，加無水乙醇75ml，混勻。
3.操作
(1) 醋酸纖維素薄膜 取醋酸纖維素薄膜，裁成2cm×8cm的膜條，將無光澤面向下，浸入巴比妥緩沖液(pH8.6)中,待完全浸透，取出夾于濾紙中，輕輕吸去多余的緩沖液后,將膜條無光澤面向上,置電泳槽架上,經(jīng)濾紙橋浸入巴比妥緩沖液(pH8.6)中。
(2) 點樣與電泳 于膜條上距負(fù)極端2cm處，條狀滴加蛋白含量約5％的供試品溶液2～3μl,在10～12V/cm電位梯度下電泳。電泳區(qū)帶距離以4～5cm為宜。
(3) 染色 電泳完畢，將膜條取下浸于氨基黑染色液中，2～3分鐘后，用漂洗液浸洗數(shù)次，直至脫去底色為止。
(4) 透明 將洗凈并完全干后的膜條浸于透明液中10～15分鐘，取出平鋪于潔凈的玻板上，干后即成透明薄膜，可于分光光度計上測定和作標(biāo)本長期保存。
(5) 含量測定 未經(jīng)透明處理的醋酸纖維素薄膜電泳圖可按各藥品項下規(guī)定的方法測定，一般采用洗脫法或掃描法，測定各蛋白質(zhì)組分的相對百分含量。 洗脫法 將洗凈的膜條用濾紙吸干，剪下供試品溶液各電泳圖譜的電泳區(qū)帶，分別浸于1.6％的氫氧化鈉溶液中，振搖數(shù)次，至洗脫完全， 于一定波長下測定吸收度。同時剪取與供試品膜條相應(yīng)的無蛋白部位，同法操作作對照。先計算吸收值總和，再計算各蛋白組分所占百分率。 掃描法 將干燥的醋酸纖維素薄膜用色譜掃描儀通過反射 （未透明薄膜） 或透射（已透明薄膜）方式在記錄器上自動繪出各蛋白組分曲線圖，橫坐標(biāo)為膜條的長度，縱坐標(biāo)為吸收度，計算各蛋白組分的百分含量。亦可用微機(jī)處理積分計算。
2.試劑
(1) 巴比妥緩沖液(pH8.6) 取巴比妥2.76g，巴比妥鈉15.45g，加水溶解使成1000ml。
(2) 氨基黑染色液 取0.5g的氨基黑10B,溶于甲醇50ml、冰醋酸10ml及水40ml的混合液中。
(3) 漂洗液 取乙醇45ml、冰醋酸5ml及水50ml，混勻。
(4) 透明液 取冰醋酸25ml，加無水乙醇75ml，混勻。
3.操作
(1) 醋酸纖維素薄膜 取醋酸纖維素薄膜，裁成2cm×8cm的膜條，將無光澤面向下，浸入巴比妥緩沖液(pH8.6)中,待完全浸透，取出夾于濾紙中，輕輕吸去多余的緩沖液后,將膜條無光澤面向上,置電泳槽架上,經(jīng)濾紙橋浸入巴比妥緩沖液(pH8.6)中。
(2) 點樣與電泳 于膜條上距負(fù)極端2cm處，條狀滴加蛋白含量約5％的供試品溶液2～3μl,在10～12V/cm電位梯度下電泳。電泳區(qū)帶距離以4～5cm為宜。
(3) 染色 電泳完畢，將膜條取下浸于氨基黑染色液中，2～3分鐘后，用漂洗液浸洗數(shù)次，直至脫去底色為止。
(4) 透明 將洗凈并完全干后的膜條浸于透明液中10～15分鐘，取出平鋪于潔凈的玻板上，干后即成透明薄膜，可于分光光度計上測定和作標(biāo)本長期保存。
(5) 含量測定 未經(jīng)透明處理的醋酸纖維素薄膜電泳圖可按各藥品項下規(guī)定的方法測定，一般采用洗脫法或掃描法，測定各蛋白質(zhì)組分的相對百分含量。 洗脫法 將洗凈的膜條用濾紙吸干，剪下供試品溶液各電泳圖譜的電泳區(qū)帶，分別浸于1.6％的氫氧化鈉溶液中，振搖數(shù)次，至洗脫完全， 于一定波長下測定吸收度。同時剪取與供試品膜條相應(yīng)的無蛋白部位，同法操作作對照。先計算吸收值總和，再計算各蛋白組分所占百分率。 掃描法 將干燥的醋酸纖維素薄膜用色譜掃描儀通過反射 （未透明薄膜） 或透射（已透明薄膜）方式在記錄器上自動繪出各蛋白組分曲線圖，橫坐標(biāo)為膜條的長度，縱坐標(biāo)為吸收度，計算各蛋白組分的百分含量。亦可用微機(jī)處理積分計算。
