反向PCR在研究轉(zhuǎn)座因子、反轉(zhuǎn)錄病及其他 能與基因組DNA整合或易位的DNA序列中有許多重要應(yīng)用。這些應(yīng)用包括序列的易位、 轉(zhuǎn)座和基因融合，其中之一是已知序列，例如癌基因或免疫系統(tǒng)的基因組成。在所有 這些情況中，如已知序列插入未知序列或與未知序列并列，反向PCR可用于測(cè)定未知 邊側(cè)序列。反向PCR的主要優(yōu)點(diǎn)是簡(jiǎn)單快速，可以研究許多獨(dú)立克隆。其某些應(yīng)用適 合于臨床診斷。
反向PCR的局限之一是由未知邊側(cè)序列性質(zhì)引起的，需用幾種酶試驗(yàn)以選擇產(chǎn)生 大小合適的片段的內(nèi)切酶。另一局限是許多常用內(nèi)切酶也在不適當(dāng)位點(diǎn)裂解載體序 列。但一旦確定合適的內(nèi)切酶，反向PCR方法是直接了當(dāng)和可靠的。
大多數(shù)真核基因組含大量中度或高度重復(fù)序列，YAC或科斯粒中未知接點(diǎn)序列有時(shí)也 包括這些序列。通過(guò)反向PCR擴(kuò)增得到的探針可與許多基因組序列雜交，但它們?cè)谟?于染色體的步查或跳查方面會(huì)受到限制，在這種情況下，需要進(jìn)行亞克隆。
反向PCR的局限之一是由未知邊側(cè)序列性質(zhì)引起的，需用幾種酶試驗(yàn)以選擇產(chǎn)生 大小合適的片段的內(nèi)切酶。另一局限是許多常用內(nèi)切酶也在不適當(dāng)位點(diǎn)裂解載體序 列。但一旦確定合適的內(nèi)切酶，反向PCR方法是直接了當(dāng)和可靠的。
大多數(shù)真核基因組含大量中度或高度重復(fù)序列，YAC或科斯粒中未知接點(diǎn)序列有時(shí)也 包括這些序列。通過(guò)反向PCR擴(kuò)增得到的探針可與許多基因組序列雜交，但它們?cè)谟?于染色體的步查或跳查方面會(huì)受到限制，在這種情況下，需要進(jìn)行亞克隆。
