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固相夾心雜交

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-07-01   瀏覽次數(shù):54
Dunn等最早介紹了夾心雜交類型,Ranki等又作了進(jìn)一步的改進(jìn),夾心雜交法比直接濾膜雜交法有兩個(gè)主要的優(yōu)點(diǎn):(1)樣品不需固定,對(duì)粗制樣品能做出可靠的檢測(cè);(2)用夾心雜交法比直接濾膜雜交法特異性強(qiáng),因?yàn)橹挥袃蓚(gè)雜交物都雜交才能產(chǎn)生可檢測(cè)的信號(hào)。
固相夾心法雜交需要兩個(gè)靠近而又互相重疊的探針,一個(gè)做固相吸附探針,另一個(gè)作標(biāo)記檢測(cè)探針,樣品基因組內(nèi)核酸只有使這兩個(gè)探針緊密相連才能形成夾心結(jié)構(gòu),需要注意的是兩探針必須分別亞克隆進(jìn)入兩個(gè)分離的非同源載體內(nèi),以避免產(chǎn)生高的本底信號(hào)。
夾心雜交法可用濾膜和小珠固定吸附探針,使用小珠可更好地進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化試驗(yàn)和更容易對(duì)小量樣品進(jìn)行操作。Dahlen等利用微孔板進(jìn)行夾心雜交,可同時(shí)進(jìn)行大量樣品檢測(cè),他們先吸附DNA探針加到凹板中,然后用紫外線照射使其固定到塑料板上,用微孔板進(jìn)行夾心雜交還可直接用于PCR技術(shù)。應(yīng)用光敏生物素標(biāo)記探針,檢測(cè)PCR產(chǎn)物的敏感性和用32P標(biāo)記探針(3×108cpm/μg)作16h放射自顯影的Southern雜交的敏感性一樣。用微孔板雜交的其它優(yōu)點(diǎn)還有可同時(shí)操作多份樣品,加樣、漂洗和讀結(jié)果等步驟可以自動(dòng)化。
 
  
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