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應(yīng)用DNA芯片技術(shù)篩選植物新基因

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-07-08
DNA芯片技術(shù)是利用核酸雜交原理檢測(cè)未知分子。它是由核酸片段如一系列用特定熒光標(biāo)記的寡核苷酸探針,以預(yù)先設(shè)計(jì)排列方式固定在載玻片或尼龍膜上組成生物集成膜片,與不同標(biāo)記的游離靶分子(DNA 或RNA)雜交,或生物集成膜片上的不同靶分子與游離的探針雜交,然后應(yīng)用熒光信號(hào)檢測(cè)器及處理器根據(jù)雜交分子或未雜交分子所發(fā)出的不同波長(zhǎng)的光檢測(cè)雜交信號(hào)。如完全雜交則發(fā)出強(qiáng)的熒光信號(hào)或特殊波長(zhǎng)信號(hào),不完全雜交信號(hào)較弱,若不能雜交則檢測(cè)不到熒光信號(hào)或只檢測(cè)到芯片上原有熒光信號(hào)。這些不同區(qū)域的熒光信號(hào)在芯片上組成熒光分布譜型,可被激光共聚焦顯微鏡激發(fā)和檢測(cè),經(jīng)電腦軟件處理檢出DNA的序列及其變化。例如斯坦福大學(xué)從外周血淋巴細(xì)胞cDNA文庫中用PCR法擴(kuò)增插入基因,得到1046種未知序列擴(kuò)增產(chǎn)物,將這些擴(kuò)增產(chǎn)物作為靶DNA點(diǎn)樣到經(jīng)包被的玻片上,制成DNA芯片,經(jīng)SDS、NaBH4等處理,95℃熱變性后分別與熱擊T細(xì)胞及未處理T細(xì)胞的cDNA雜交,經(jīng)激光共聚焦掃描系統(tǒng)分析,共發(fā)現(xiàn)17個(gè)差異表達(dá)的基因,其中11個(gè)是被熱誘導(dǎo)的,其余6個(gè)是被熱擊抑制的,經(jīng)序列分析表明其中3個(gè)為未發(fā)現(xiàn)的新基因。植物上最近已有應(yīng)用cDNA芯片對(duì)草莓、矮牽牛進(jìn)行基因表達(dá)的檢測(cè)。
  DNA芯片技術(shù)在發(fā)現(xiàn)新基因及分析各個(gè)基因在不同時(shí)空表達(dá)方面是一項(xiàng)十分有用的技術(shù),已有學(xué)者對(duì)其在農(nóng)業(yè)上的應(yīng)用作了展望,如應(yīng)用DNA芯片技術(shù)有望更深入地了解植物生長(zhǎng)發(fā)育的內(nèi)在機(jī)制、植物生長(zhǎng)激素的作用機(jī)制、轉(zhuǎn)基因工程株的實(shí)驗(yàn)室快速分析、了解小分子對(duì)基因表達(dá)的影響及加速DNA多態(tài)性的檢測(cè)等。
 
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