1.HPLC對流動相的一般要求

流動相就比如人體的血液，其質(zhì)量直接影響到整個系統(tǒng)的正常運行與否。

（1）應(yīng)該使用HPLC級的溶劑，不能互相混溶的溶劑不可以直接切換！一般在水相和與其不混溶的溶劑切換時，使用異丙醇作為過渡溶劑。

（2）注意溶劑的截止波長。截止波長是指該溶劑可以在紫外檢測器中使用的最低波長,低于該波長后,溶劑會有很強的紫外吸收，從而影響極限的穩(wěn)定性、干擾對所分析物質(zhì)的檢測。

（3）HPLC所使用的水必須是新鮮的和經(jīng)過0.45μm濾膜過濾過的。建議每天更換新鮮的水。長期不用時，必須把使用水的管路用有機溶劑置換，防止長霉。

（4）儀器使用完后要采用適當?shù)娜軇�沖洗等方法維護色譜柱和系統(tǒng)。如果使用了緩沖鹽一定先將鹽要沖洗干凈。

（5）儀器長期不用時，不建議使用純乙腈封存。因為乙腈有生成聚合物的趨勢。建議使用甲醇、甲醇/水或乙腈/水封存。

（6）當有流路堵塞時，可以嘗試將之反接后沖洗。污染的溶劑或溶劑瓶里的藻類生長將會縮短溶劑過濾器的使用壽命，并且影響泵和系統(tǒng)的的性能。這在水溶劑或磷酸鹽緩沖液(pH4至7)中尤其如此。

2.泵的使用要點

（1）將裝有溶劑瓶的溶劑箱放在泵上面或較高處。當在四元泵上使用鹽溶液或有機溶劑時，建議將鹽溶液接在下面的梯度閥口上，將有機溶劑接在上面的梯度閥口上，有機溶劑通道最好在水或鹽溶液通道的正上面。建議用水定期沖洗所有MCGV通道除去可能在閥口析出的鹽結(jié)晶。

（2）操作泵之前，用至少兩個體積（標準脫氣機30mL，對微脫氣機10mL）沖洗真空脫氣機,特別是當泵關(guān)閉了一段時間后(例如，過夜)，以及在通道中使用揮發(fā)性混合溶劑時，防止溶劑瓶內(nèi)的玻璃濾頭(過濾器)堵塞及長菌，當濾頭表面有黑色或黃色污染層說明發(fā)生了堵塞，應(yīng)立即清洗或更換。

（3）定期檢查排液閥的過濾白頭。檢查方法：擰開排液閥，以水作流動相。    

（4）對于標準脫氣機(G1322A)來說,流速為5mL/min水，若壓力大于10bar，則建議更換。 

（5）對于微量脫氣機(G1379A)來說,流速為2mL/min水，若壓力大于5bar，則建議更換。

（6）當使用低流速時，檢查所有1/16英寸接頭有無滲漏（用壓力測試或漏液測試。每當更換泵密封墊時排液閥慮芯也應(yīng)更換。

（7）更換活塞密封墊時檢查活塞桿上是否有劃痕。有劃痕的活塞將導(dǎo)致輕度滲漏，并降低密封墊的使用壽命。應(yīng)盡早更換有劃痕的活塞。

（8）使用緩沖溶液時，關(guān)泵前先用水沖洗系統(tǒng)。當需要長時間使用0.1摩爾或更高濃度的緩沖液時，最好選用密封墊清洗附件，以減少對密封墊及活塞桿的磨損。

（9）如果使用了高濃度的緩沖鹽，可以考慮用熱水（50－60℃）來沖洗鹽通道來確保沒有緩沖鹽殘留在系統(tǒng)中。

（10）更換活塞密封墊后應(yīng)按照密封墊安裝步驟對其進行磨合，但磨合不適用于正相密封墊。

（11）當泵頭安裝有柱塞清洗附件時，由于該附件中也有密封墊，這樣就會增加活塞桿運動時的阻力。所以開泵前一定要用10％異丙醇，并將其流速調(diào)至約2－3滴/分鐘使溶液流過沖洗裝置。(對于二元泵SL，如果不使用鹽溶液可以不開)10％異丙醇有助于降低水的表面張力，并有抑菌作用。不要用其它溶劑代替。

當泵頭安裝有沖洗附件而不開啟10％異丙醇，會使密封墊及活塞桿的壽命減短(二元泵SL除外)，泵頭如果發(fā)出“吱吱”聲不影響使用和泵的精度如果有必要，可以改變壓縮因子（compressibility）來達到更好的效果。

3. 自動進樣器

（1）樣品在進樣前必須經(jīng)過適當?shù)念A(yù)先處理，需要經(jīng)過亞微米濾膜的過濾或者離心，防止樣品中的微小顆粒堵塞管路，最好使用流動相作為溶劑配制樣品，所用溶劑應(yīng)該對樣品有較好的溶解性。

（2）針座是喇叭口朝上暴露在空氣中的，有時空氣中的較大灰塵顆�？赡芮『寐湓卺樧�的流路內(nèi)而引起針座的堵塞。這時候可以嘗試卸下針座，將它接在泵的出口上反沖，一般能解決問題。

（3）如果經(jīng)常使用緩沖溶液，除了泵頭之外，ALS計量泵的柱塞及密封圈，六通閥的轉(zhuǎn)子密封圈和定子密封圈應(yīng)該定期清洗，防止有鹽的顆粒磨損ALS一定要使用Agilent的樣品瓶及瓶蓋；使用不兼容的或者加工精度差的樣品瓶及瓶蓋會引起ALS故障率的增加及性能的降低。

4. DAD常見故障及維護

（1）故障

（2）HPLC日常維護

（3） HPLC常見故障診斷