硫磺霜由間苯二酚、升華硫、甘油等成分組成。主要用于治療體癬、脂溢性皮炎等。原標準中無間苯二酚的含量測定方法，為了更好地控制藥品質(zhì)量，本實驗建立了高效液相色譜法測定硫磺霜中間苯二酚含量的新方法。

 

1、儀器與試劑

 

SSISPC3000高效液相色譜儀；梅特勒百萬分之一天平(AG135)。硫磺霜本院自制制劑批號：080201，080202，080202；間苯二酚對照品由中國藥品生物制品檢定所提供，批號：100389-200301；甲醇為色譜純，乙酸為分析純。

 

2、方法與結(jié)果

 

2.1色譜條件色譜柱為KromasilC18柱(4.6mm×250mm,5μm)；流動相為甲醇-2%乙酸溶液(40:60)［1］；檢測波長254nm［2］；流速1.0ml/min;柱溫為室溫；進樣量為10μl,理論板數(shù)按間苯二酚峰計算應(yīng)不低于2000。

 

2.2溶液的制備

 

2.2.1對照品溶液的制備精密稱取在硫酸干燥器中干燥至恒重的間苯二酚對照品［3］約30mg,置50ml量瓶中，加乙醇30ml振搖溶解，加乙醇至刻度，搖勻。精密量取續(xù)濾液5ml，置50ml量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，作為對照品溶液。

 

2.2.2供試品溶液的制備取本品約1g，精密稱定，置50ml量瓶中，加乙醇30ml，水浴加熱使基質(zhì)溶解，放冷，加乙醇至刻度，搖勻，置冰浴中冷凍2h，取出，迅速過濾，精密量取續(xù)濾液5ml，置50ml量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

 

2.2.3陰性樣品溶液的制備取不含間苯二酚的陰性樣品，同供試品溶液的制備方法制備。

 

2.3線性范圍的考察精密稱取間苯二酚約60mg，加水溶解后定容至50ml，搖勻，分別取10，5，3，2，1ml加水稀釋至50ml，搖勻，制成系列對照品溶液。分別進樣10μl，測定峰面積，以濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標進行線性回歸，線性方程：A=1687C 2078.1(r=0.9993，n=5)。

 

2.4精密度實驗吸取間苯二酚對照品溶液10μl(60μg/ml)，連續(xù)進樣5次，測得間苯二酚峰面積值的RSD=0.92%,精密度良好。

 

2.5穩(wěn)定性實驗取供試品溶液分別于0，1，2，4，8h分別測定其峰面積，結(jié)果間苯二酚RSD為0.86%。試驗結(jié)果表明待測溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定。

 

2.6重復(fù)性實驗取同一批號樣品5份，按供實品溶液的制備方法制備成供試品溶液，按上述條件進行測定，結(jié)果間苯二酚含量平均值為99.6%，RSD為0.95%。表明實驗重復(fù)性良好。

 

2.7回收率實驗取空白樣品9份，分別精密加入間苯二酚適量(約相當(dāng)于制劑中間苯二酚含量的80%，100%，120%)，照含量測定項下方法依法測定間苯二酚含量，計算回收率。結(jié)果見表1。表1間苯二酚回收率試驗結(jié)果(略)

 

2.8樣品測定

 

取本品1g，精密稱定，置50ml量瓶中加乙醇30ml，水浴加熱使基質(zhì)溶解，放冷，加乙醇至刻度，搖勻，置冰浴中冷凍2h，取出，迅速過濾，精密量取續(xù)濾液5ml，置50ml量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，取10μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖。另取間苯二酚對照品溶液10μl(60μg/ml)，同法測定，按外標法以峰面積計算，即得。

 

2.9樣品含量測定結(jié)果供試品3批含量測定結(jié)果見表2。表2間苯二酚含量測定結(jié)果(略)

 

3、討論

 

取供試品溶液與對照品溶液、陰性樣品溶液，分別進樣，結(jié)果供試品呈現(xiàn)與間苯二酚保留時間相同的色譜峰，而陰性樣品溶液在該保留時間處未見色譜峰，說明陰性樣品溶液不干擾供試品的測定。