（1）DEPC是RNA酶的化學(xué)修飾劑，它和RNA酶的活性基團(tuán)組氨酸的咪唑環(huán)反應(yīng)而抑制酶活性。

（2）DEPC與氨水溶液混合會產(chǎn)生致癌物，因而使用時需小心。

（3）試驗(yàn)所用試劑也可用DEPC處理，加入DEPC至0.1%濃度然后劇烈振蕩10分鐘再煮沸15分鐘或高壓滅菌以消除殘存的DEPC，否則DEPC也能和腺嘌呤作用而破壞mRNA活性。

（4）但DEPC能與胺和巰基反應(yīng)，因而含Tris和DTT的試劑不能用DEPC處理。

實(shí)驗(yàn)步驟如下：

1. 取50~100mg的組織加入1 ml Trizol試劑，用勻漿器打勻（Trizol 先放于冰上）。

2. 將勻漿室溫放置5 min。

3. 加入200 μl 氯仿劇烈震蕩混勻30s，冰上靜置3 min。

4. 12000 rpm，4℃ 離心15 min。

5. 將上清液小心轉(zhuǎn)移到新的1.5 ml離心管中（取400 μl ），加入等量體積的異丙醇，上下顛倒幾次混勻，室溫下放置15 min。（此步中留意：不要吸取任何中間層物質(zhì)，寧缺勿濫。）

6. 12000 rpm，4℃ 離心15 min 。

7. 小心移去上清液，防止RNA沉淀丟失。

8. 用70%乙醇（DEPC處理的水配制）洗滌1次，加入700 μl乙醇，將RNA沉淀彈起，漂洗。（此時RNA是不溶解的）

9. 8000 rpm，室溫離心10min。

10. 盡可能徹底地吸走上清，防止RNA沉淀丟失。

11. 真空離心干燥3~5分鐘，或放在室溫下使乙醇完全揮發(fā)掉。

12. 沉淀用30 μl DEPC-H₂O溶解。如發(fā)現(xiàn)沉淀難溶，68 ℃處理10 min。

13. RNA檢測

（1）測定樣品在260 nm和280 nm的吸光值 按1OD=40 μg/ ml RNA計算RNA的產(chǎn)量。OD260/OD280在1.8-2.0 。

（2）進(jìn)行甲醛變性瓊脂糖凝膠電泳確定RNA的完整性和污染情況。

低得率：A.樣品裂解或勻漿處理不徹底；B.最后得到的RNA沉淀未完全溶解。