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3M環(huán)境李斯特菌測試片操作以及判讀 | ||
| 一、測試環(huán)境李斯特菌數(shù) 操作方法 | |||
 1. 將未開封的測試片貯藏在<= 8 oC (46 oF)的環(huán)境下，并在包裝上標示的有效期內(nèi)使用。在高濕度的地方，最好在使用前將測試片回復到室溫。 |
 2. 已開封的測試片，將開口反折，用膠帶封好。 |
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 3. 為防止暴露于潮濕的環(huán)境中，請不要冷藏已開封的測試片。將膠帶封好的測試片貯藏在低溫干燥的地方，保持時間不超過1個月。請勿將測試片放在溫度> 25 oC (77 oF)和(或)相對濕度> 50%的環(huán)境中。 |
 4. 用涂抹棒、海棉或其它采樣設(shè)備收集環(huán)境樣本。濕潤采樣設(shè)備的液體應<= 10 mL。濕潤劑可以是無菌水、緩沖蛋白胨水(Buffered Peptone Water, BPW)，或中和緩沖液，如Letheen肉湯或Dey/Engley (DE)中和肉湯。 |
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 5. 在無菌環(huán)境下在收集的樣品中添加5 mL，20-30oC，滅過菌的緩沖蛋白胨水(BPW)溶液。 不要將Petrifilm EL測試片與Vermont 培養(yǎng)基(UVM)、Fraser肉湯、李斯特菌增菌培養(yǎng)基 (LEB)或緩沖李斯特菌增菌培養(yǎng)基(BLEB)共用。 |
 6. 混合，蠕動或旋轉(zhuǎn)樣品與BPW的混合液將近一分鐘。將樣品置于室溫(20-30 oC) 1h，最久不超過1.5 h，以修復損傷的李斯特菌。 |
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 7. 將測試片置于平坦表面處，揭開上層膜。 |
 8. 用3MTM電子移液槍或其它移液器垂直滴加3 mL樣品到下層膜的中央。 |
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 9. 將上層膜緩慢蓋下，以免產(chǎn)生氣泡。 |
 10. 輕輕地將塑料壓板放在位于接種區(qū)上層膜上。不要壓，扭轉(zhuǎn)或滑動壓板。提起壓板。等至少10分鐘，以使膠體凝固。 |
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 11. 將測試片透明面朝上，可疊放至10片，在35oC ± 1oC或37oC ± 1oC下培養(yǎng)28h ± 2 h。 |
 12. Petrifilm EL測試片能夠用標準的菌落計數(shù)器或其它光學放大器計數(shù)或判讀。不要計數(shù)圓形輪廓上的菌落，因為它們不受選擇性培養(yǎng)基的作用。 |
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Petrifilm EL測試片法可用于定性、半定量及定量檢測
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13. 對于定性檢測，根據(jù)紫紅色菌落的存在與否，將結(jié)果計為檢出和未檢出。 如果是/否的結(jié)果已經(jīng)能夠滿足報告要求，那么你可以選擇定性檢測。 |
 14. 對于半定量檢測，根據(jù)出現(xiàn)紫紅色菌落的相對量來記錄結(jié)果。 如果你是根據(jù)菌落數(shù)的相對含量來采取相應的措施，并且沒必要記錄實際菌落數(shù)，那么你可以選擇半定量檢測。李斯特菌的含量應記錄為對采樣區(qū)域和企業(yè)標準有指導意義的形式(如低，中，高，或可接受和不可接受) |
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未檢出
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檢出
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 15. 對于定量檢測，計數(shù)所有紫紅色菌落。 如果你根據(jù)菌落數(shù)來采取相應的措施，你可以采用定量檢測。測試片上李斯特菌數(shù)：16請參考判讀手冊的“定量采樣與判讀”部分來計算每個環(huán)境樣本中的李斯特菌數(shù)。 |
 16. 可挑區(qū)菌落進行進一步鑒定。掀起上層膜，從膠上挑取菌落。 |
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定量采樣與判讀
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如果你以定量方式使用3M Petrifilm EL 測試片，請參考產(chǎn)品的包裝插件，然后按下述方式計算單位面積的菌落數(shù)(Colony Forming Units, CFU)。同時，你也要注意以下幾點： 1.穩(wěn)定性是在環(huán)境監(jiān)控過程中獲得有用信息的關(guān)鍵點，所以在采樣過程中應使用相同的步驟。理想情況下，應使用相同類型的取樣設(shè)備，模板面積，技術(shù)員和采樣技術(shù)。 為了測定單位采樣面積的李斯特菌數(shù)，你需要記錄以下數(shù)據(jù)： |
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或
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| 環(huán)境定量采樣符合以下文獻： Standard Methods for the Examination of Dairy Products, Section 3.7D, American Public Health Association, Washington D. C., 1992. Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods, Section 3.512 and 3.521, American Public Health Association, Washington D. C., 2001 |
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定量判讀
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 1. 用10 mL液體濕潤海綿，涂抹采樣面，如面積為1平方英尺(1 ft2)。 |
 2. 將海綿放回無菌容器，加入5 mL緩沖蛋白胨水(BPW)。 |
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 3. 修復完成后，吸取3 mL混合液接種到Petrifilm EL測試片。 |
 4. 培養(yǎng)后，進行菌落計數(shù) (在本例中，假設(shè)菌落數(shù)為90)。 |
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 1. 用1 mL液體濕潤涂抹頭，涂抹采樣面，如面積為50平方厘米(50 cm2). |
 2. 將涂抹棒放回無菌容器中，添加5 mL緩沖蛋白胨水(BPW)。 |
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 3. 修復完成后，吸取3 mL混合液接種到Petrifilm EL 測試片。 |
 4. 培養(yǎng)后，進行菌落計數(shù) (在本例中，假如菌落數(shù)為90)。 |
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| 二、測試環(huán)境李斯特菌 判讀方法 | |||
| 3MTM PetrifilmTM Environmental Listeria(EL) 測試片是一種預先制備好的培養(yǎng)基，含有選擇性試劑，營養(yǎng)成分，冷水可溶性的凝膠和有助于菌落檢測的顯色指示劑。Petrifilm EL 測試片可用于檢測或計數(shù)環(huán)境樣本中的李斯特菌數(shù)。Petrifilm EL 測試片檢測的李斯特菌包括單核增生李斯特菌(L.monocytogenes) 英諾克李斯特菌 (L.innocua)，格氏/墨氏李斯特菌(L.grayi/murrayi)，威爾李斯特菌(L.welshimeri)，但不能區(qū)分各種菌。 環(huán)境條件和消毒劑可能會抑制或損傷微生物。緩沖蛋白胨緩沖液(Buffered Peptone Water, BPW) 能用作修復肉湯和Petrifilm EL測試片結(jié)合使用。但李斯特菌在緩存蛋白胨緩沖液中的修復過程不是增菌步驟。 |
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 1. 圖1 為長有李斯特菌的典型Petrifilm EL 測試片。判讀或計數(shù)所有的紫紅色菌落為李斯特菌。如果在26-29 小時，有灰色或淡粉紅色菌落存在，需繼續(xù)培養(yǎng)。在培養(yǎng)時間內(nèi)，由灰色或淡粉紅色加深為紫紅色的菌落應判定為李斯特菌。在最大培養(yǎng)時間(30小時)仍保持灰色或淡粉紅色的菌落不應判讀為李斯特菌。不考慮或計數(shù)圓形輪廓上的菌落，因為它們不受選擇性培養(yǎng)基的作用。定性判讀： 測試片檢出李斯特菌。 半定量判讀：李斯特菌的含量應記錄為對采樣區(qū)域和企業(yè)標準有指導意義的形式(如低，中，高，或可接受和不可接受)。 定量判讀： 測試片上的李斯特菌數(shù)：11。 請參考判讀手冊的“定量采樣與判讀”部分來計算每個環(huán)境樣本中的李斯特菌數(shù)。 |
 2. 該Petrifilm EL 測試片在培養(yǎng)30小時后沒有菌落生長，實驗結(jié)束。定性判讀： 測試片上未檢出李斯特菌。 半定量判讀：李斯特菌的含量應記錄為對采樣區(qū)域和企業(yè)標準有指導意義的形式(如低，中，高，或可接受和不可接受)。 定量判讀：測試片上的李斯特菌數(shù)：< 1。 請參考判讀手冊的“定量采樣與判讀”部分來計算每個環(huán)境樣本中的李斯特菌數(shù)。 |
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 3. Petrifilm EL測試片對李斯特菌具有選擇性，其菌落顯示為紫紅色。定性判讀： 測試片上檢出李斯特菌。 半定量判讀：李斯特菌的含量應記錄為對采樣區(qū)域和企業(yè)標準有指導意義的形式(如低，中，高，或可接受和不可接受)。 定量判讀：測試片上的李斯特菌數(shù)：84 。 請參考判讀手冊的“定量采樣與判讀”部分來計算每個環(huán)境樣本中的李斯特菌數(shù)。 |
 4. 由于Petrifilm EL測試片的判讀方式有三種，所以沒有建議的計數(shù)范圍。當菌落密集時，按以下方式判讀定性或半定量的結(jié)果，或估算定量的結(jié)果。定性判讀：測試片上檢出李斯特菌。 半定量判讀：李斯特菌的含量應記錄為對采樣區(qū)域和企業(yè)標準有指導意義的形式(如低，中，高，或可接受和不可接受)。 定量判讀：測試片上估算的李斯特菌數(shù)：約460。當大量李斯特菌存在時，通過計數(shù)兩個或兩個以上的具有代表性方格的菌落數(shù)來估算。計算每個方格的平均菌落數(shù)數(shù)后乘以42。Petrifilm EL測試片的接種面積近似42 cm2。 |
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 5. 當菌落數(shù)很多時，測試片上可能有許多小的，不清楚的菌落，和(或) 呈現(xiàn)全部的粉紅色至棕色。定性判讀：測試片上檢出李斯特菌。 半定量判讀：李斯特菌的含量應記錄為對采樣區(qū)域和企業(yè)標準有指導意義的形式(如低，中，高，或可接受和不可接受)。 定量判讀：測試片上的李斯特菌數(shù)為多不可計(Too Numerous To Count, TNTC)。該圖中的菌落數(shù)近似104。 |
 6. 背景顏色可能會因為環(huán)境樣本中的灰塵、泥土、砂子、或其它沉淀物而發(fā)生變化，也可能是因為采樣設(shè)備和(或) 緩沖蛋白胨水(修復液)的品牌不同而引起。紫紅色菌落判讀為李斯特菌。定性判讀：測試片上檢出李斯特菌。 半定量判讀：李斯特菌的含量應記錄為對采樣區(qū)域和企業(yè)標準有指導意義的形式(如低，中，高，或可接受和不可接受)。 定量判讀：測試片上的李斯特菌數(shù)：11。 請參考判讀手冊的“定量采樣與判讀”部分來計算每個環(huán)境樣本中的李斯特菌數(shù)。 |
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