艾滋病，既獲得性免疫缺陷綜合癥（ AIDS ），是由人類免疫缺陷病毒（ HIV ）引起的一種免疫缺陷性疾病。到 2002 年 6 月底全球已有 6000 萬(wàn)人感染了 HIV ，其中 2000 萬(wàn)人已被艾滋病奪去生命，艾滋病正已每天 1.4 萬(wàn)人受感染的速度擴(kuò)大流行，目前該病尚無(wú)法治愈，也無(wú)有效疫苗。截止到 2003 底我國(guó) HIV 感染者已近 84 萬(wàn)，進(jìn)入了快速增長(zhǎng)期，據(jù)有關(guān)專家估計(jì)，如不采取積極有效的控制措施，到 2010 年我國(guó) HIV 感染者將達(dá) 1000 萬(wàn)，形勢(shì)十分嚴(yán)峻。 HIV 感染的診斷是艾滋病預(yù)防控制工作的重要組成部分，只有發(fā)現(xiàn)傳染源才能更有效地控制艾滋病傳播。通過(guò)檢測(cè) HIV 的特異性抗體、抗原、核酸或病毒分離培養(yǎng)可確立 HIV 感染， WHO 和我國(guó)衛(wèi)生部推薦使用的 HIV 感染診斷方法是血清學(xué)抗體檢測(cè)。。
一、 HIV 檢測(cè)的特殊性
HIV 檢測(cè)不同于其他病原微生物檢測(cè)，要求十分嚴(yán)格，任何錯(cuò)誤的診斷，包括假陽(yáng)性或假陰性，都會(huì)對(duì)被檢者產(chǎn)生十分重要的影響。因此， HIV 檢測(cè)必須嚴(yán)格按照國(guó)家制定的《艾滋病檢測(cè)工作管理辦法》和《艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范》（以下簡(jiǎn)稱《規(guī)范》）進(jìn)行，檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)室須經(jīng)當(dāng)?shù)匦l(wèi)生行政部門審批合格，從事艾滋病檢測(cè)工作的技術(shù)人員須接受專門的技術(shù)培訓(xùn)，并獲合格證書，診斷試劑應(yīng)選擇高敏感和高特異的，篩查呈陽(yáng)性反應(yīng)的需用特異性更強(qiáng)的方法（如：免疫印跡試驗(yàn)）進(jìn)行確認(rèn)，整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程應(yīng)有嚴(yán)格的質(zhì)量保證體系。
二、 HIV 抗體檢測(cè)
目前國(guó)外用于 HIV 抗體篩查的方法很多，根據(jù)檢測(cè)原理不同分為酶聯(lián)免疫吸附法、凝集法和層析法，可對(duì)血液、唾液和尿液標(biāo)本進(jìn)行常規(guī)或快速檢測(cè)。在實(shí)際工作中常用的有酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ ELISA ）、明膠凝集試驗(yàn)和各種快速診斷試劑。自 1985 年第一代 ELISA 試劑問(wèn)世以來(lái)，隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的飛速發(fā)展，包被抗原已從一代的全病毒裂解物發(fā)展為目前以基因重組和多肽抗原包被和標(biāo)記、有著良好敏感性和特異性的三代雙抗原夾心試劑，檢測(cè)亞型包括 HIV-1 、 HIV-2 和 HIV-1 型的 O 亞型，窗口期由 10 周縮短至 3-4 周。為避免窗口期傳染，荷蘭、法國(guó)等國(guó)已研制出第四代以重組的多肽抗原和抗 P24 抗體包被的雙抗原夾心法試劑盒，可同時(shí)檢測(cè)抗原抗體，使窗口期縮短了 2-3 周，但其臨床價(jià)值有待評(píng)估。按《規(guī)范》要求，我國(guó)采供血機(jī)構(gòu)進(jìn)行血液篩查和各醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)常規(guī)篩查檢測(cè)宜采用 ELISA 法，自采自供血的單位必須進(jìn)行 HIV 抗體檢測(cè)，在尚未建立艾滋病篩查實(shí)驗(yàn)室的偏遠(yuǎn)地區(qū)或大醫(yī)院急診手術(shù)前可由經(jīng)過(guò)培訓(xùn)的技術(shù)人員在規(guī)定的場(chǎng)所用快速試劑進(jìn)行血液篩選。對(duì)用 ELISA 試劑或快速診斷試劑進(jìn)行的篩查實(shí)驗(yàn)如呈陰性反應(yīng)，即報(bào)告 HIV 抗體陰性；對(duì)呈陽(yáng)性反應(yīng)的標(biāo)本，篩查實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用原有試劑和另外一種不同原理或不同廠家的試劑進(jìn)行重復(fù)檢測(cè)，如兩種試劑復(fù)測(cè)均呈陰性反應(yīng)，則報(bào)告 HIV 抗體陰性；如均呈陽(yáng)性反應(yīng)，或一陰一陽(yáng)，需送艾滋病確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行確認(rèn)。篩查試劑必須是 HIV-1/2 混合型、經(jīng)國(guó)家藥品監(jiān)督管理局（ SDA ）注冊(cè)批準(zhǔn)、批批檢合格、臨床評(píng)估質(zhì)量?jī)?yōu)良、在有效期內(nèi)的試劑。
HIV 抗體篩查呈陽(yáng)性反應(yīng)的標(biāo)本由于存在假陽(yáng)性的可能，必須做確認(rèn)試驗(yàn)。國(guó)際上有 3 種確認(rèn)試驗(yàn)方法，包括免疫印跡試驗(yàn)、條帶免疫試驗(yàn)及免疫熒光試驗(yàn)，目前以免疫印跡試驗(yàn)最為常用。確認(rèn)試劑必須經(jīng) SDA 注冊(cè)批準(zhǔn)。免疫印跡試劑有 HIV-1/2 混合型和單一型，按《規(guī)范》要求，一般先用 HIV-1/2 混合型試劑進(jìn)行檢測(cè)，根據(jù)《規(guī)范》中判定免疫印跡試驗(yàn)結(jié)果的基本原則并參照所用試劑說(shuō)明書綜合判定，無(wú) HIV 抗體特異帶出現(xiàn)的報(bào)告 HIV 抗體陰性；出現(xiàn) HIV 抗體特異帶，符合 HIV-1 抗體陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)，則報(bào)告 HIV-1 抗體陽(yáng)性。如出現(xiàn) HIV-2 型的特異性條帶，需用 HIV-2 型免疫印跡試劑再做單一的 HIV-2 型抗體確認(rèn)試驗(yàn)，呈陰性反應(yīng)，報(bào)告 HIV-2 抗體陰性；呈陽(yáng)性反應(yīng)的則報(bào)告 HIV-2 抗體血清學(xué)陽(yáng)性，如需鑒別應(yīng)進(jìn)行核酸序列分析。如果出現(xiàn) HIV 抗體特異帶，但帶型不足以判定為陽(yáng)性，則判為 HIV 抗體不確定。對(duì) HIV 抗體不確定者應(yīng)按《規(guī)范》要求進(jìn)行隨訪，必要時(shí)可做 HIV-1 P24 抗原或核酸測(cè)定，但檢測(cè)結(jié)果只能作為輔助診斷依據(jù)，確認(rèn)報(bào)告要依據(jù)血清學(xué)隨訪結(jié)果。
由于目前唾液檢測(cè)試劑的敏感性和尿液檢測(cè)試劑的特異性明顯低于血液檢測(cè)試劑，故我國(guó) SDA 已注冊(cè)批準(zhǔn)的 HIV 抗體篩查和確認(rèn)試劑只能用于血液標(biāo)本檢測(cè)。
三、 HIV 抗體檢測(cè)的質(zhì)量控制
在所有實(shí)驗(yàn)中必須包含有內(nèi)部對(duì)照質(zhì)控血清和外部對(duì)照質(zhì)控血清。
內(nèi)部對(duì)照質(zhì)控血清指試劑盒內(nèi)提供的陽(yáng)性和陰性對(duì)照血清。內(nèi)部對(duì)照是質(zhì)量控制的基礎(chǔ)，每次檢測(cè)必須使用內(nèi)部對(duì)照，而且只能在同批號(hào)的試劑盒中使用。
外部對(duì)照質(zhì)控血清是由實(shí)驗(yàn)室設(shè)置的弱陽(yáng)性對(duì)照，一般以該試劑盒臨界值（ Cut off ）的 2-3 倍為宜。該血清可到專門單位購(gòu)買，也可由實(shí)驗(yàn)室自己制備。制備方法是：收集 HIV 抗體陽(yáng)性和陰性血清， 56 ℃ 30min 滅活， 3000rpm 離心 15min ，弱陽(yáng)性對(duì)照可以用 HIV 抗體陰性的健康人血清梯度稀釋 HIV 抗體強(qiáng)陽(yáng)性血清、或用試劑盒內(nèi)提供的陽(yáng)性和陰性對(duì)照血清混合并標(biāo)定后得到，一般按一年使用量配制，用 0.2 μ m 濾膜過(guò)濾除菌，按一周實(shí)驗(yàn)用量分裝、分類、標(biāo)記并封口， -20 ℃ 凍存。該血清不可反復(fù)凍融，融化后應(yīng)存放 2 -8 ℃ ，一周內(nèi)使用。原則上每次實(shí)驗(yàn)必須使用外部對(duì)照質(zhì)控 血清，以便監(jiān)控本次實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性和穩(wěn)定性，同時(shí)了解各批試劑盒的批間差異，繪制質(zhì)量控制圖。
四、 HIV-1 P24 抗原檢測(cè)
HIV 感染人體后有一段窗口期，在這段時(shí)期病毒抗體不能被檢出，但可以檢測(cè)到病毒相關(guān)抗原或分離病毒。故在窗口期檢測(cè)抗原是早期輔助診斷和縮短窗口期的一種方法，在感染早期和發(fā)病期抗原檢出率相對(duì)較高。 HIV-1 P24 抗原檢測(cè)還適用于： HIV-1 陽(yáng)性母親所生嬰兒的早期輔助鑒別診斷；第四代 HIV-1 抗原 / 抗體 ELISA 試劑檢測(cè)呈陽(yáng)性反應(yīng)、但 HIV-1 抗體確認(rèn)陰性者的輔助診斷；監(jiān)測(cè)病程進(jìn)展和抗病毒治療效果。
P24 抗原檢測(cè)一般用 ELISA 雙抗體夾心法試劑，必須經(jīng)過(guò) SDA 批準(zhǔn)注冊(cè)。
HIV-1 P24 抗原的陽(yáng)性結(jié)果必須經(jīng)過(guò)中和試驗(yàn)確認(rèn) , 該結(jié)果僅作為 HIV 感染的輔助診斷依據(jù)，不能據(jù)此確診； HIV-1 P24 抗原檢測(cè)陰性只表示在本試驗(yàn)中無(wú)反應(yīng)，不能排除 HIV 感染。
五、 HIV 核酸檢測(cè)
HIV 核酸檢測(cè)，通常是檢測(cè) HIV RNA ，以前只能定性檢測(cè)血液中是否存在病毒核酸，而目前的技術(shù)可定量檢測(cè)血液中病毒復(fù)制水平。 HIV 核酸定性檢測(cè)可用于 HIV 感染的輔助診斷，如窗口期輔助診斷、病程監(jiān)控、指導(dǎo)治療方案及療效測(cè)定、預(yù)測(cè)疾病進(jìn)程等。通常使用 PCR 或 RT-PCR 技術(shù)，使用分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室通用的擴(kuò)增試劑，引物可來(lái)自文獻(xiàn)或自行設(shè)計(jì)，應(yīng)盡量覆蓋所有或常見(jiàn)的毒株，也可使用復(fù)合引物。 HIV 核酸定量檢測(cè)多用于監(jiān)測(cè) HIV 感染者的病程進(jìn)展和抗病毒治療效果，目前常用的測(cè)定方法有逆轉(zhuǎn)錄 PCR 實(shí)驗(yàn)（ RT-PCR ）、核酸序列擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)（ NASBA ）、分支 DNA 雜交實(shí)驗(yàn)（ bDNA ）等。在不同 HIV 定量檢測(cè)方法的選擇中，由于目前用于統(tǒng)一不同定量方法檢測(cè)值的標(biāo)準(zhǔn)品尚未問(wèn)世，因此不同定量方法結(jié)果之間還無(wú)法直接進(jìn)行比較，建議同一病人治療前后用同一方法進(jìn)行 HIV 定量檢測(cè)。
值得注意的是， HIV 核酸定性檢測(cè)陰性，只可報(bào)告本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果陰性，但不能排除 HIV 感染； HIV 核酸檢測(cè)陽(yáng)性，可作為診斷 HIV 感染的輔助指標(biāo)，不能單獨(dú)用于 HIV 感染的診斷，報(bào)告定性檢測(cè)結(jié)果時(shí)還應(yīng)注明反應(yīng)條件和所使用的引物序列。報(bào)告 HIV 核酸定量檢測(cè)結(jié)果時(shí)應(yīng)按照儀器讀數(shù)報(bào)告結(jié)果，注明使用的試驗(yàn)方法、樣品種類和樣品量，當(dāng)測(cè)定結(jié)果小于最低檢測(cè)限時(shí)，應(yīng)注明最低檢測(cè)限水平，低于最低檢測(cè)限的結(jié)果不能排除 HIV 感染。
六、 CD4 T 淋巴 細(xì)胞計(jì)數(shù)
CD4 T 淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)是艾滋病診斷、疾病分期、制定抗病毒治療和預(yù)防機(jī)會(huì)性感染方案的實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)指標(biāo)，美國(guó) CDC1993 年修訂的青年 / 成人艾滋病監(jiān)測(cè)病例分類及擴(kuò)大的診斷標(biāo)準(zhǔn)是：無(wú)癥狀 HIV 感染期（ A 1 、 A 2 ）： CD4 絕對(duì)數(shù)≥ 500/mm 3 或 CD4 百分率≥ 29% ；有癥狀感染期（ B 1 、 B 2 ）： CD4 絕對(duì)數(shù) 200-499/mm 3 或 CD4 百分率 14-28% ； AIDS 期（ A 3 、 B 3 、 C 1-3 ）： CD4 絕對(duì)數(shù)＜ 200/mm 3 或＜ 14% 。 CD4 T 淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)也是與病毒載量相配合預(yù)測(cè)疾病進(jìn)程的可靠指標(biāo)，這兩個(gè)實(shí)驗(yàn)可以相互獨(dú)立預(yù)測(cè)艾滋病臨床過(guò)程和生存期。檢測(cè) CD4 細(xì)胞數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)方法是流式細(xì)胞儀。影響 CD4 細(xì)胞數(shù)的因素有季節(jié)、晝夜差、某些并發(fā)癥和皮質(zhì)醇類藥物等，而性別、成人年齡、緊張、生理性應(yīng)激和妊娠對(duì) CD4 的細(xì)胞數(shù)影響不大。由于 CD4 百分?jǐn)?shù)受變異影響較絕對(duì)數(shù)小，故 CD4 細(xì)胞百分率有時(shí)比絕對(duì)數(shù)對(duì)臨床更有意義。
七、病毒變異和耐藥性的測(cè)定
隨著 HAART 治療的廣泛開(kāi)展，病毒變異和耐藥株正在不斷出現(xiàn)，甚至對(duì)一個(gè)藥物的耐藥可引起多種藥物的交叉耐藥。因此近年來(lái)各國(guó)相繼建立起病毒變異和耐藥的測(cè)試方法，目前常用的方法包括基因型 HIV 耐藥測(cè)試和表型 HIV 耐藥測(cè)試。 表型 HIV 耐藥性測(cè)試方法能直接測(cè)出 HIV-1 對(duì)藥物的敏感度，并能揭示事先存在或交叉的耐藥情況，有利于指導(dǎo) HIV-1 感染者有效地用藥。目前市面上供應(yīng)試劑盒已有 2 種，即 AV （ Vicro Antivirogram ）和 PS （ Virologic PhenoSense ），兩者方法均應(yīng)用從生長(zhǎng)于載體中的 HIV-1 而獲得的重組病毒和病人標(biāo)本中蛋白酶與逆轉(zhuǎn)錄酶序列，分析與野病毒之間 IC50 值相差倍數(shù)，一般達(dá) 5—10 倍以上為陽(yáng)性。這種方法的最大優(yōu)點(diǎn)是可以獲得各種藥物耐藥量度數(shù)據(jù)，但不足的是試驗(yàn)慢又昂貴，技術(shù)要求高。當(dāng)病毒對(duì)某些藥物產(chǎn)生耐藥性時(shí)，病毒基因會(huì)發(fā)生一些明確的突變。病毒耐藥基因型的檢測(cè)有助于預(yù)測(cè)某些藥物的治療效果�；蛐� HIV 耐藥性測(cè)試方法是通過(guò)從病人血液標(biāo)本中分離到的 HIV 基因物質(zhì)，應(yīng)用核酸酸序列分析或雜交技術(shù)以確定病毒變異的位點(diǎn)，并可參考已有數(shù)據(jù)庫(kù)按不同亞型進(jìn)行比較。在確認(rèn)變異后，與既往耐藥或交叉耐藥研究比較，間接地估計(jì)藥物耐藥情況，簡(jiǎn)單快速，費(fèi)用低。缺點(diǎn)是能確認(rèn)所分離到的基因變異，但無(wú)法指出藥物耐藥的程度。
應(yīng)當(dāng)強(qiáng)調(diào)的是，我國(guó)自 1995 年進(jìn)入艾滋病流行的快速增長(zhǎng)期，感染者中約 70% 為經(jīng)靜脈吸毒等血液途徑感染，按艾滋病自然病程，近 1-2 年將會(huì)出現(xiàn)艾滋病的發(fā)病高潮，醫(yī)院系統(tǒng)所承擔(dān)的艾滋病檢測(cè)工作將愈來(lái)愈重，因此各醫(yī)院檢驗(yàn)科應(yīng)嚴(yán)格按《規(guī)范》要求，通過(guò) HIV 抗體篩查和確認(rèn)試驗(yàn)提供準(zhǔn)確的 HIV 感染診斷，通過(guò) CD4 T 淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)和 / 或 HIV 核酸定量檢測(cè)為艾滋病診斷、判斷疾病進(jìn)展和抗艾滋病治療療效觀察提供可靠的實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)。