一、目的與要求：

1.掌握雙硫腙比色法測定鉛含量的原理與方法。

    2.熟悉72工型分光光度計(jì)的工作原理和使用方法。

    二、原理：

    樣品經(jīng)消化后，在PH8.5-9.0時(shí)，鉛離子與雙硫腙生成紅色絡(luò)合物，溶于三氯甲烷，加入檸檬酸銨，氰化鉀和鹽酸羥胺等，防止鐵、銅、鋅等離子干擾，與標(biāo)準(zhǔn)系列比較定量。   

    三、試劑：  

    l、1：1氨水；    、

    2、6N鹽酸：量取100毫升鹽酸，加水稀釋至200ml。

    3、酚紅指示液：0.1％乙醇溶液。  

    4、20％鹽酸羥胺溶液：稱取20克鹽酸羥胺，加水溶解至約50ml，加2滴酚紅指示液，加1：1氨水，調(diào)PH至8.5-9.0(由黃變紅，再多加2滴)用雙硫腙-三氯甲烷溶液提取至三氯甲烷層綠色不變?yōu)橹�，棄去再用三氯甲烷洗二次，棄去三氯甲烷層，水層�?N鹽酸呈酸隆，加水至100毫升。 

    5、20％檸檬酸銨溶液：稱取50克檸檬酸銨，溶于100毫升水中，加2滴酚紅指示液，加l：1氨水，調(diào)PH至8.5-9.0，用雙硫腙-三氯甲烷溶液提取數(shù)次，每次10-20ml，至三氯甲烷層綠色不變?yōu)橹�，棄去三氯甲烷層，再用三氯甲烷洗二次，每�?ml，棄去三氯甲烷層，加水稀釋至250毫升。

    6、10％氰化鉀溶液；   

    7、三氯甲烷；不應(yīng)含氧化物。

    (1)檢查方法：量取10ml三氯甲烷，加25ml新煮沸過的水，振搖3分鐘，靜置分層后，取10ml水液，加數(shù)滴15％碘化鉀溶液及淀粉指示液，振搖后應(yīng)不顯藍(lán)色。

    (2)處理方法：于三氯甲烷中加人工1／10-1／20體積的20％硫酸鈉溶液洗滌，再用水洗后加入少量無水氯化鈣脫水后進(jìn)行蒸餾，棄去最初及最后的l／10餾出液，收集中間餾出液備用。

     8、淀粉指示液：稱取0.5克可溶性淀粉，加5ml水?dāng)噭蚝�，慢慢倒入lOOml沸水中，隨到攪拌，煮沸，放冷備用。用時(shí)配制。

    9、1％硝酸：量取1ml硝酸，加水稀釋至100ml。  

    10、雙硫腙溶液：0.5％三氯甲烷溶液，保存冰箱中，必要時(shí)用下述方法純化。

    稱取0.5克研細(xì)的雙硫腙，溶于50ml三氯甲烷中，如不全溶；可用濾紙過濾于250m1分液漏斗中，用1：99氨水提取三次，每次100ml，將提取液用棉花過濾至500m1分液漏斗中，用6N鹽酸調(diào)至酸性，將沉淀出的雙硫腙用三氯甲烷提取2-3次，每次20ml，合并三氯甲烷層，用等量水洗滌二次，棄去洗滌液，在50℃水浴上蒸去三氯甲烷。精制的雙硫腙置硫酸干燥器中，干燥備用�；�?qū)⒊恋沓龅碾p硫腙用200，200，100ml三氯甲烷提取三次，合并三氯甲烷層為雙硫腙溶液。  

11、雙硫腙使用液：吸取1.Oml雙硫腙溶液，加三氯甲烷至10ml，混勻。用：1cm比色杯，以三氯甲烷調(diào)節(jié)零點(diǎn)，于波長510nm處測吸光度(A)下式用算出配制100m1雙硫腙使用液(70％透光率)所需雙硫腙溶液的毫升數(shù)(N)。      

                 V =(10(2-lg70))/A=1.55/A

12、鉛標(biāo)準(zhǔn)溶液：精密稱取0.1598克硝酸鉛，加10ml1％硝酸，全部溶解后，移入100ml容量瓶中，加水稀釋至刻度，此溶液每毫升相當(dāng)于lml鉛。             

13、鉛標(biāo)準(zhǔn)使用液：吸取1.0ml鉛標(biāo)準(zhǔn)溶液，置于100毫升容量瓶中，加水稀釋至刻度。此溶液每毫升相當(dāng)于10mg鉛。   

四、儀器：

    1、所用玻璃儀器均用l0-20％硝酸浸泡24小時(shí)以上，用自來水反復(fù)沖洗，最后用水沖洗干凈。

    2、分光光度計(jì)。  

五、操作方法：

1、樣品消化

(1)硝酸-硫酸法

a、醬、醬油、醋、豆腐乳、醬腌菜等：稱取10.0克樣品(或吸取10.Oml液體樣品)，置于250ml定氮瓶中，加數(shù)粒玻璃珠，lOml硝酸，放置片刻，小火加熱、待作用緩和，放冷，沿瓶壁加入1％硝酸，再加熱，至瓶中液體開始變成棕色時(shí)，不斷沿瓶壁滴加硝酸有機(jī)質(zhì)分解完全。加熱火力，至產(chǎn)生白煙，溶液應(yīng)澄清無色或微帶黃色，放冷。在操作過程中應(yīng)注意防止爆炸。

    加20ml水煮沸，除去殘余的硝酸至產(chǎn)生白煙為止，如此處理兩次，放冷。將冷后的溶液移入50ml或lOOml容量瓶中用水洗滌定氮瓶，洗液并容量瓶中再放冷，加水至刻度，混勻。定容后的溶液每lml相當(dāng)于2g樣品或2ml樣品．  

b、含酒精性飲料或二氧化碳飲料：吸取10.Oml樣，置于250ml定氮瓶中，加數(shù)粒玻璃珠，先用小火加熱除去乙醇或二氧化碳，再加lOml硝酸，混勻后，以下按(a)自“放置片刻”起依法操作，但定容后的溶液每10ml相當(dāng)于2m1樣品。   

c、含糖量高的食品：稱取1.0克樣品，置于250ml定氮瓶中，先加少許水使?jié)駶�，加�?shù)粒玻璃珠，10ml硝酸，搖勻，緩緩加入10ml硫酸，待作用緩和停止起泡沫后，先用小火緩緩加熱(糖分易炭化)，不斷沿瓶壁：加硝酸，待泡沫全部消失后，再加大火力，至有機(jī)質(zhì)分解完全發(fā)生白煙，溶液應(yīng)澄清無色或微帶黃色，放冷。以下按a自“加20ml水煮沸”起依法操作。  

    以上濕法消化要同時(shí)作空白試驗(yàn)。

    (2)灰化法   

    a、糕點(diǎn)及其他含水分少的食品：稱取5.0克樣品，置于坩堝中，加：至炭化，然后移入高溫爐中，500℃灰化3小時(shí)、放冷，取出坩堝，加l ml 硝酸、濕潤灰分，用小火蒸干，在500℃灼燒1小時(shí)，放冷，取出坩堝。加lml 硝酸，加熱，使灰分溶解，移入50ml容量瓶中，用水沸滌坩堝,洗液并入容量瓶中，加水至刻度，混勻備用。

    b、含水分多的食品或液體樣品：稱取5.0克或5.0ml樣品，置于蒸發(fā)皿中，先在水浴上蒸于，再按a自“加熱至炭化”起依法操作。

    2、測定

     吸取10.Oml消化后的定容溶液和同量的試劑空白液，分別置于125ml分液漏斗中，各加水至20ml。

吸取0.00、0.10、0.20、0.30、0.40、0.50ml鉛標(biāo)準(zhǔn)使用液(相當(dāng)于0、 1、2、3、4、5mg鉛)分別置于125m1分液漏斗中，各加1％硝酸溶液至20ml。    

于樣品消化液，試劑空白液和鉛標(biāo)準(zhǔn)液中各加2m120％檸檬酸銨溶液，lml20％鹽酸羥胺溶液和2滴酚紅指示液，用1：1氨水調(diào)至紅色，再各加2ml10％氰化鉀溶液，混勻。各加5.Oml  硫腙使用液，劇烈振搖1分鐘，靜置分層后，三氯甲烷層經(jīng)脫脂棉濾人1cm比色杯中，以零點(diǎn)于波長5lOnm處測吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線比較。

   計(jì)算：   

         X=((A₁—A₂)×1000)/( m×V₂/V₁×1000)

    X：樣品中鉛的含量，mg／kg或mg／L；

    A₁：測定用樣品消化液中鉛的含量，mg；

    A₂：試劑空白液中鉛的含量，mg；

    M：樣品質(zhì)量(體積)，克(m1)；

    V₁：樣品消化液的總體積(m1)；

    V₂：測定用樣品消化液體積，m1。