為證實(shí)在利用與串聯(lián)四級(jí)桿質(zhì)譜儀聯(lián)用的 ACQUITY UPLC^® I-Class系統(tǒng)進(jìn)行超高效色譜生物分析時(shí)，能夠?qū)⒎治鑫飶膹?fù)雜基質(zhì)中分離出來(lái)。 
 

精確檢測(cè)生物分析樣品需要一種具高特異性且高靈敏度的方法。LC/MS/MS已經(jīng)成為首選的方法；該方法的特異性是依賴于采用色譜分離來(lái)分離分析物與內(nèi)源性基質(zhì)組分，以及在質(zhì)譜儀中采用多反應(yīng)監(jiān)測(cè)技術(shù)(MRM)進(jìn)行檢測(cè)。 

為實(shí)現(xiàn)分析的耐受性，應(yīng)使待檢測(cè)的分析物與內(nèi)源性基質(zhì)峰(例如磷脂)分離，否則可能會(huì)導(dǎo)致離子抑制并由此導(dǎo)致結(jié)果不可重現(xiàn)。 

通常會(huì)權(quán)衡生物分析的分析速度與分離度,以達(dá)到最佳的色譜分析效果。較長(zhǎng)的分離時(shí)間會(huì)使分離度更佳，但會(huì)使通量減少。 

然而，隨著相關(guān)法規(guī)日漸嚴(yán)格，以及對(duì)分析靈敏度的要求逐漸提高，對(duì)色譜性能也提出了更高的要求。例如干血斑以及微量采樣這樣的采樣技術(shù)已經(jīng)對(duì)當(dāng)前方法的檢測(cè)極限提出了挑戰(zhàn)。 
 

ACQUITY UPLC I-Class系統(tǒng)專為進(jìn)行超高效色譜分離而設(shè)計(jì)。它的先進(jìn)技術(shù)可以使即使在較高系統(tǒng)背景壓力下工作時(shí)，也能很好的控制擴(kuò)散以及譜帶擴(kuò)展。這些因素使得在進(jìn)行生物分析時(shí)能夠采用更長(zhǎng)的分析色譜柱，同時(shí)也不會(huì)減少通量，還能夠產(chǎn)生非常尖銳的分析峰。 

一超高效UPLC/MS/MS性能實(shí)例如圖1所示。從中我們可以觀察到氟替卡松丙酸酯及昔美酸沙美特羅已從干血斑中分離出來(lái)。該次分析是在2.1 x 150 mm ACQUITY UPLC C 18 1.7-ìm色譜柱上進(jìn)行，并用50:85甲醇/氫氧化銨水溶液梯度梯度洗脫10分鐘。橙色圖譜表示正離子全掃描MS數(shù)據(jù)；沙美特羅及氟替卡松丙酸酯的MRM譜圖已用藍(lán)色分別表示。

從中我們可以看出，干血斑中含有大量干擾物質(zhì)，這些干擾物質(zhì)是來(lái)自于添加至板上的化學(xué)藥品。超高效ACQUITY UPLC I-Class系統(tǒng)可產(chǎn)生非常尖銳的峰形，可在無(wú)基質(zhì)干擾下定量?jī)煞N藥物分子。 

進(jìn)一步說(shuō)明該系統(tǒng)的超高效，將氟替卡松丙酸酯及昔美酸沙美特羅添加至大鼠血漿，并利用乙腈使其沉淀(比例2:1)。于該實(shí)例中，經(jīng)時(shí)5分鐘，利用5:95甲醇/甲酸水溶液梯度來(lái)洗脫分析物，如圖2

上述數(shù)據(jù)說(shuō)明，如藍(lán)色所示的背景全掃描MS色譜的復(fù)雜程度比干血斑更高。橙色線表示兩種藥物化合物的MRM信號(hào)，在2.58分鐘時(shí)洗脫出沙美特羅，且在2.65分鐘時(shí)洗脫出氟替卡松丙酸酯。自UPLC/MS/MS數(shù)據(jù)可以看出，ACQUITY UPLC I-Class系統(tǒng)可以超高效使已沉淀血漿樣品中的內(nèi)源性物質(zhì)與分析物分離，因此可準(zhǔn)確且可靠地定量分析物。
 

四、小結(jié) 
 

ACQUITY UPLC I-Class系統(tǒng)可提供最高水平的色譜性能，提供極佳的分布特性，以及由于增加的背壓能力因而可使用長(zhǎng)度更長(zhǎng)的色譜柱。使用超高效UPLC進(jìn)行生物分析可產(chǎn)生尖銳的分析物峰，因而可產(chǎn)生最大的靈敏度以及最高的分離度，并使樣品中內(nèi)源性物質(zhì)的共溶出最少。該系統(tǒng)的高背壓有利于使用較長(zhǎng)的超高效色譜柱，運(yùn)行時(shí)間僅為5至及10分鐘。