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支原體常用培養(yǎng)基為PPLO,很多公司都有出售.但血清 (常用馬血清或豬血清)和抗生素(醋酸跎)你要自己加.你可以查查.還有改良的Frey's培養(yǎng)基，常用的微生物實(shí)驗(yàn)技術(shù)書(shū)上都可以查到的�？梢宰约号渲频�。在液體培養(yǎng)基中通常要加入酚紅做指示劑的，當(dāng)培養(yǎng)基由紅色變?yōu)辄S色時(shí)，即可判定支原體的生長(zhǎng)程度。要強(qiáng)調(diào)一點(diǎn)，支原體的分離可能不太容易，那么要多盲傳幾代。液體培養(yǎng)基變黃后，在固體培養(yǎng)基上單克隆，以純化分離的菌。
所有解脲，人型，肺炎，生殖道支原體培養(yǎng)基 ，均為液態(tài)，不知道homiao要分離哪種支原體，需要哪種支原體?
1、培養(yǎng) ：支原體的培養(yǎng)37℃即可，當(dāng)然，初次培養(yǎng)37℃，5%-10%co2效果更好。其中，解脲支原體生長(zhǎng)比較快，用我所培養(yǎng)基，接種量104- 105ccu，培養(yǎng)16-18h即可達(dá)到對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期。人型，肺炎，24-48h即可達(dá)到對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期。
2、鑒定：主要靠菌落染色、生化反應(yīng)及特異性生長(zhǎng)抑制試驗(yàn)等.
(1)Dienes菌落染色 Dienes染色液： 美藍(lán) 2.5g 天青-Ⅱ 1.5g 麥芽糖 10g 碳酸鈉 0.5g 蒸餾水 100ml
染色時(shí)，直接吸染色液覆蓋菌落，1min后，用生理鹽水洗去染色液，低倍鏡下可見(jiàn)支原體菌落呈藍(lán)色，而其他菌菌落不著色。
(2)生化反應(yīng)
根據(jù)不同采樣部位及對(duì)底物的分解或者作為能源，可以鑒別不同支原體。
解脲支原 分解尿素不分解精氨酸，生成NH3使培養(yǎng)基的ph升高，酚紅指示劑變紅。
人型支原體分解L-精氨酸不分解尿素，生成NH3使PH值升高，酚紅指示劑變紅。
肺炎和人型支原體分解葡萄糖，使pH降低，酚紅指示劑由紅變黃。
(3)在含0.002%美藍(lán)的培養(yǎng)基中肺炎支原體能生長(zhǎng)且將美藍(lán)還原而退色，其他口腔、唾液或發(fā)酵支原體均被抑制生長(zhǎng)，此法可鑒定肺炎支原體。
(4)分子生物學(xué)鑒定
由于支原體的基因文庫(kù)已建立，通過(guò)pcr擴(kuò)增和基因探針技術(shù)可以對(duì)支原體進(jìn)行鑒定。
如果要自己配制培養(yǎng)基，現(xiàn)提供幾種配方：
基礎(chǔ)培養(yǎng)基：Hayflick培養(yǎng)基(PPLO培養(yǎng)基)，牛心粉 50g 蛋白胨 10g 氯化鈉 5g 加14g瓊脂粉為固體培養(yǎng)基
(1) 肺炎支原體培養(yǎng)基
基礎(chǔ)培養(yǎng)基 70ml 牛血清 (滅活) 20ml 25%的酵母浸液 10ml 50%葡萄糖 1-2ml 0.4 酚紅 0.5ml 制霉素 0.001g 青霉素 10萬(wàn)IU pH 7.8
(2)人型支原體培養(yǎng)基
基礎(chǔ)培養(yǎng)基 70ml 馬血清 20ml 25%的酵母浸液 10ml 30%L-精氨酸 0.33ml 0.4%酚紅 0.5ml 制霉素 0.001g 青霉素 10萬(wàn)IU pH 6.3
(3)解脲支原體培養(yǎng)基
基礎(chǔ)培養(yǎng)基 70ml 馬血清 20ml 25%的酵母浸液 10ml 30%尿素0.33ml 0.4%酚紅 0.5ml 制霉素 0.001g 青霉素 10萬(wàn)IU pH 6.0
注：由于支原體能在人工培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，但是營(yíng)養(yǎng)要求較高，需要提供膽 固醇和酵母才能生長(zhǎng)。以上配方中，馬(牛).血清提供膽固醇，酵母浸液提供酵母。
