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色譜柱是高效液相色譜儀最主要的部件，被測(cè)物質(zhì)能否被很好的分離和測(cè)定，色譜柱的性能起著決定性的作用，因此，應(yīng)特別注意色譜柱的活化環(huán)節(jié)，此外色譜柱的日常維護(hù)也很重要，有效地維護(hù)可以延長(zhǎng)色譜柱的使用壽命。
液相色譜的柱子通常分為正相柱和反相柱。正相柱大多以硅膠為柱，或是在硅膠表面鍵合-CN,-NH3等官能團(tuán)的鍵合相硅膠柱；反相柱填料主要以硅膠為基質(zhì)，在其表面鍵合非極性的十八烷基官能團(tuán)（ODS）稱為C18柱，其它常用的反相柱還有C8,C4,C2和苯基柱等。另外還有離子交換柱，GPC柱，聚合物填料柱等。
色譜柱的活化
新的液相色譜柱都是保存在一定的保存液中的，所謂的活化就是替換掉其中的保存液，沖洗掉柱中可能殘留的其他雜質(zhì)，以免影響后續(xù)分析工作。液相色譜柱的活化方法因柱子而異。
反相色譜柱：使用新的C18柱時(shí)，先用甲醇或乙-腈沖洗20-30個(gè)柱體積，然后用甲醇/乙-腈：水（50:50）沖洗10個(gè)柱體積，然后再用流動(dòng)相平衡10-30柱體積。
正相色譜柱：新柱用流動(dòng)相平衡20-30個(gè)柱體積。
離子色譜柱（SAX, SCX）：新柱先用100%甲醇或乙-腈沖洗20個(gè)柱體積，然后轉(zhuǎn)換到流動(dòng)相平衡。
不同的色譜柱活化的方法不盡相同，要根據(jù)柱子的種類來(lái)選擇活化方法。另外，要提醒的是，柱子活化時(shí)不要接檢測(cè)器，避免不必要的污染。
液相色譜柱的維護(hù)
色譜柱的維護(hù)有一定的程序：色譜柱的平衡、色譜柱的再生、最后才是色譜柱的維護(hù)。
1、色譜柱的平衡
反相色譜柱由工廠測(cè)試后是保存在乙腈/水中的。新柱應(yīng)先使用10-20倍柱體積的甲醇或乙腈沖洗色譜柱。請(qǐng)一定確保您分析樣品所使用的流動(dòng)相和乙腈/水互溶。每天用足夠的時(shí)間以流動(dòng)相來(lái)平衡色譜柱，您就會(huì)在處理問(wèn)題方面獲得最大的"補(bǔ)償"，而且您的色譜柱的壽命也會(huì)變得更長(zhǎng)!
操作步驟：
a. 平衡開始時(shí)將流速緩慢地提高，用流動(dòng)相平衡色譜柱直到獲得穩(wěn)定的基線（緩沖鹽或離子對(duì)試劑流速如果較低，則需要較長(zhǎng)的時(shí)間來(lái)平衡）
b. 如果使用的流動(dòng)相中含有緩沖鹽，應(yīng)注意用純水"過(guò)渡"即每天分析開始前必須先用純水沖洗30分鐘以上再用緩沖鹽流動(dòng)相平衡; 分析結(jié)束后必須先用純水沖洗30分鐘以上除去緩沖鹽之后再用甲醇沖洗30分鐘保護(hù)柱子。
2、色譜柱的再生
長(zhǎng)期使用的色譜柱，往往柱效會(huì)下降（柱子的理論塔板數(shù)減低）�？梢詫�(duì)色譜柱進(jìn)行再生，在有條件的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)使用一個(gè)廉價(jià)的泵進(jìn)行柱子的再生。
選擇再生方法：
極性固定相（如Si，NH2* ，DIOL基色譜填料）的再生：正庚烷→氯仿→乙酸乙酯→丙酮→乙醇→水。
非極性固定相（如反相色譜填料RP-18，RP-8，CN等）的再生：水→乙腈→氯仿（或異丙醇）→乙腈→水。
注意：
a. 在對(duì)NH2改性的色譜柱進(jìn)行再生時(shí)，由于NH2可能以銨根離子的形式存在，因此應(yīng)該在水洗后用0.1M的氨水沖洗，然后再用水沖洗至堿溶液完全流出。
b. 0.05M稀硫酸可以用來(lái)清洗已污染的色譜柱，如果簡(jiǎn)單的用有機(jī)溶劑/水的處理不能夠完全洗去硅膠表面吸附的雜質(zhì)，在水洗后加用0.05M稀硫酸沖洗非常有效。
3、色譜柱的維護(hù)
a.使用預(yù)柱保護(hù)分析柱（硅膠在極性流動(dòng)相/離子性流動(dòng)相中有一定的溶解度）；
b.大多數(shù)反相色譜柱的pH穩(wěn)定范圍是2-7.5，盡量不超過(guò)該色譜柱的pH范圍；
c.避免流動(dòng)相組成及極性的劇烈變化；
d.流動(dòng)相使用前必須經(jīng)脫氣和過(guò)濾處理；
e.如果使用極性或離子性的緩沖溶液作流動(dòng)相，應(yīng)在實(shí)驗(yàn)完畢柱子沖洗干凈，并保存于甲醇或乙腈中；
f.氯化物的溶劑對(duì)其有一定的腐蝕性，故使用時(shí)要注意，柱及連接管內(nèi)不能長(zhǎng)時(shí)間存留此類溶劑，以避免腐蝕。
液相色譜柱的使用注意事項(xiàng)
液相色譜柱的儲(chǔ)存液無(wú)特殊說(shuō)明，均為評(píng)價(jià)報(bào)告所示的流動(dòng)相。在使用前，一定要注意液相色譜柱的儲(chǔ)存液與要分析樣品的流動(dòng)相是否互溶。在反相色譜中，如用高濃度的鹽或緩沖液作洗脫劑，應(yīng)先用10%左右的低濃度的有機(jī)相洗脫劑過(guò)渡一下，否則緩沖液中的鹽在高濃度的有機(jī)相中很容易析出，堵塞色譜柱。
1、流動(dòng)相
流動(dòng)相中所使用的各種有機(jī)溶劑要盡可能使用色譜純，配流動(dòng)相的水最好是超純水或全玻璃器皿的雙蒸水。如果將所配得流動(dòng)相再經(jīng)過(guò)0.45μm 的濾膜過(guò)濾一次則更好，尤其是含鹽的流動(dòng)相。另外，裝流動(dòng)相的容器和色譜系統(tǒng)中的在線過(guò)濾器等裝置應(yīng)該定期清洗或更換。
但如果您實(shí)驗(yàn)室中同時(shí)有液質(zhì)與液相的話，建議液質(zhì)的流動(dòng)相不要輕易過(guò)膜，容易出現(xiàn)交叉污染，或者液質(zhì)使用專門的過(guò)膜儀器。
液相與液質(zhì)混用過(guò)膜裝置，導(dǎo)致三乙胺進(jìn)入質(zhì)譜，響應(yīng)突然下降。
以常規(guī)硅膠為基質(zhì)的鍵合相填料通常的pH值適用范圍是2.0-8.0。當(dāng)必須要在pH值適用范圍的邊界條件下使用色譜柱時(shí)，每次使用結(jié)束后立即用適合于色譜柱儲(chǔ)存并與所使用的流動(dòng)相互溶的溶劑清洗，并完全置換掉原來(lái)所使用的流動(dòng)相。
不同填料的色譜柱，PH、柱溫的范圍是不一樣的。
2、樣品
樣品也要盡可能清潔，可選用樣品過(guò)濾器或樣品預(yù)處理柱（spe）對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理；若樣品不便處理，要使用保護(hù)柱。在用正相色譜法分析樣品時(shí)，所有的溶劑和樣品應(yīng)嚴(yán)格脫水。
一般樣品高速離心就可以了，但需注意取上清時(shí)，不要取到下面的沉淀物質(zhì)以及色譜柱前最好加裝 預(yù)柱或在線過(guò)濾器。
3、反相液相色譜柱色譜柱每天實(shí)驗(yàn)后的保養(yǎng)
使用緩沖液或含鹽的流動(dòng)相，實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)用10%的甲醇/水沖洗30分鐘，洗掉色譜柱中的鹽，再用甲醇沖洗30分鐘。注意：不能用純水沖洗柱子，應(yīng)該在水中加入10%的甲醇，防止將填料沖塌陷。
4、長(zhǎng)期保存色譜柱
如色譜柱要長(zhǎng)時(shí)間保存，必須存于合適的溶劑下。對(duì)于反相柱可以儲(chǔ)存于純甲醇或乙腈中，正相柱可以儲(chǔ)存于嚴(yán)格脫水后的純正己烷中，離子交換柱可以儲(chǔ)存于水（含防腐劑疊氮化鈉或柳硫汞）中，并將購(gòu)買新色譜柱時(shí)附送的堵頭堵上。儲(chǔ)存的溫度最好是室溫。
文章（文字）來(lái)源：化學(xué)掌中寶。
液相色譜的柱子通常分為正相柱和反相柱。正相柱大多以硅膠為柱，或是在硅膠表面鍵合-CN,-NH3等官能團(tuán)的鍵合相硅膠柱；反相柱填料主要以硅膠為基質(zhì)，在其表面鍵合非極性的十八烷基官能團(tuán)（ODS）稱為C18柱，其它常用的反相柱還有C8,C4,C2和苯基柱等。另外還有離子交換柱，GPC柱，聚合物填料柱等。
色譜柱的活化
新的液相色譜柱都是保存在一定的保存液中的，所謂的活化就是替換掉其中的保存液，沖洗掉柱中可能殘留的其他雜質(zhì)，以免影響后續(xù)分析工作。液相色譜柱的活化方法因柱子而異。
反相色譜柱：使用新的C18柱時(shí)，先用甲醇或乙-腈沖洗20-30個(gè)柱體積，然后用甲醇/乙-腈：水（50:50）沖洗10個(gè)柱體積，然后再用流動(dòng)相平衡10-30柱體積。
正相色譜柱：新柱用流動(dòng)相平衡20-30個(gè)柱體積。
離子色譜柱（SAX, SCX）：新柱先用100%甲醇或乙-腈沖洗20個(gè)柱體積，然后轉(zhuǎn)換到流動(dòng)相平衡。
不同的色譜柱活化的方法不盡相同，要根據(jù)柱子的種類來(lái)選擇活化方法。另外，要提醒的是，柱子活化時(shí)不要接檢測(cè)器，避免不必要的污染。
液相色譜柱的維護(hù)
色譜柱的維護(hù)有一定的程序：色譜柱的平衡、色譜柱的再生、最后才是色譜柱的維護(hù)。
1、色譜柱的平衡
反相色譜柱由工廠測(cè)試后是保存在乙腈/水中的。新柱應(yīng)先使用10-20倍柱體積的甲醇或乙腈沖洗色譜柱。請(qǐng)一定確保您分析樣品所使用的流動(dòng)相和乙腈/水互溶。每天用足夠的時(shí)間以流動(dòng)相來(lái)平衡色譜柱，您就會(huì)在處理問(wèn)題方面獲得最大的"補(bǔ)償"，而且您的色譜柱的壽命也會(huì)變得更長(zhǎng)!
操作步驟：
a. 平衡開始時(shí)將流速緩慢地提高，用流動(dòng)相平衡色譜柱直到獲得穩(wěn)定的基線（緩沖鹽或離子對(duì)試劑流速如果較低，則需要較長(zhǎng)的時(shí)間來(lái)平衡）
b. 如果使用的流動(dòng)相中含有緩沖鹽，應(yīng)注意用純水"過(guò)渡"即每天分析開始前必須先用純水沖洗30分鐘以上再用緩沖鹽流動(dòng)相平衡; 分析結(jié)束后必須先用純水沖洗30分鐘以上除去緩沖鹽之后再用甲醇沖洗30分鐘保護(hù)柱子。
2、色譜柱的再生
長(zhǎng)期使用的色譜柱，往往柱效會(huì)下降（柱子的理論塔板數(shù)減低）�？梢詫�(duì)色譜柱進(jìn)行再生，在有條件的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)使用一個(gè)廉價(jià)的泵進(jìn)行柱子的再生。
選擇再生方法：
極性固定相（如Si，NH2* ，DIOL基色譜填料）的再生：正庚烷→氯仿→乙酸乙酯→丙酮→乙醇→水。
非極性固定相（如反相色譜填料RP-18，RP-8，CN等）的再生：水→乙腈→氯仿（或異丙醇）→乙腈→水。
注意：
a. 在對(duì)NH2改性的色譜柱進(jìn)行再生時(shí)，由于NH2可能以銨根離子的形式存在，因此應(yīng)該在水洗后用0.1M的氨水沖洗，然后再用水沖洗至堿溶液完全流出。
b. 0.05M稀硫酸可以用來(lái)清洗已污染的色譜柱，如果簡(jiǎn)單的用有機(jī)溶劑/水的處理不能夠完全洗去硅膠表面吸附的雜質(zhì)，在水洗后加用0.05M稀硫酸沖洗非常有效。
3、色譜柱的維護(hù)
a.使用預(yù)柱保護(hù)分析柱（硅膠在極性流動(dòng)相/離子性流動(dòng)相中有一定的溶解度）；
b.大多數(shù)反相色譜柱的pH穩(wěn)定范圍是2-7.5，盡量不超過(guò)該色譜柱的pH范圍；
c.避免流動(dòng)相組成及極性的劇烈變化；
d.流動(dòng)相使用前必須經(jīng)脫氣和過(guò)濾處理；
e.如果使用極性或離子性的緩沖溶液作流動(dòng)相，應(yīng)在實(shí)驗(yàn)完畢柱子沖洗干凈，并保存于甲醇或乙腈中；
f.氯化物的溶劑對(duì)其有一定的腐蝕性，故使用時(shí)要注意，柱及連接管內(nèi)不能長(zhǎng)時(shí)間存留此類溶劑，以避免腐蝕。
液相色譜柱的使用注意事項(xiàng)
液相色譜柱的儲(chǔ)存液無(wú)特殊說(shuō)明，均為評(píng)價(jià)報(bào)告所示的流動(dòng)相。在使用前，一定要注意液相色譜柱的儲(chǔ)存液與要分析樣品的流動(dòng)相是否互溶。在反相色譜中，如用高濃度的鹽或緩沖液作洗脫劑，應(yīng)先用10%左右的低濃度的有機(jī)相洗脫劑過(guò)渡一下，否則緩沖液中的鹽在高濃度的有機(jī)相中很容易析出，堵塞色譜柱。
1、流動(dòng)相
流動(dòng)相中所使用的各種有機(jī)溶劑要盡可能使用色譜純，配流動(dòng)相的水最好是超純水或全玻璃器皿的雙蒸水。如果將所配得流動(dòng)相再經(jīng)過(guò)0.45μm 的濾膜過(guò)濾一次則更好，尤其是含鹽的流動(dòng)相。另外，裝流動(dòng)相的容器和色譜系統(tǒng)中的在線過(guò)濾器等裝置應(yīng)該定期清洗或更換。
但如果您實(shí)驗(yàn)室中同時(shí)有液質(zhì)與液相的話，建議液質(zhì)的流動(dòng)相不要輕易過(guò)膜，容易出現(xiàn)交叉污染，或者液質(zhì)使用專門的過(guò)膜儀器。
液相與液質(zhì)混用過(guò)膜裝置，導(dǎo)致三乙胺進(jìn)入質(zhì)譜，響應(yīng)突然下降。
以常規(guī)硅膠為基質(zhì)的鍵合相填料通常的pH值適用范圍是2.0-8.0。當(dāng)必須要在pH值適用范圍的邊界條件下使用色譜柱時(shí)，每次使用結(jié)束后立即用適合于色譜柱儲(chǔ)存并與所使用的流動(dòng)相互溶的溶劑清洗，并完全置換掉原來(lái)所使用的流動(dòng)相。
不同填料的色譜柱，PH、柱溫的范圍是不一樣的。
2、樣品
樣品也要盡可能清潔，可選用樣品過(guò)濾器或樣品預(yù)處理柱（spe）對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理；若樣品不便處理，要使用保護(hù)柱。在用正相色譜法分析樣品時(shí)，所有的溶劑和樣品應(yīng)嚴(yán)格脫水。
一般樣品高速離心就可以了，但需注意取上清時(shí)，不要取到下面的沉淀物質(zhì)以及色譜柱前最好加裝 預(yù)柱或在線過(guò)濾器。
3、反相液相色譜柱色譜柱每天實(shí)驗(yàn)后的保養(yǎng)
使用緩沖液或含鹽的流動(dòng)相，實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)用10%的甲醇/水沖洗30分鐘，洗掉色譜柱中的鹽，再用甲醇沖洗30分鐘。注意：不能用純水沖洗柱子，應(yīng)該在水中加入10%的甲醇，防止將填料沖塌陷。
4、長(zhǎng)期保存色譜柱
如色譜柱要長(zhǎng)時(shí)間保存，必須存于合適的溶劑下。對(duì)于反相柱可以儲(chǔ)存于純甲醇或乙腈中，正相柱可以儲(chǔ)存于嚴(yán)格脫水后的純正己烷中，離子交換柱可以儲(chǔ)存于水（含防腐劑疊氮化鈉或柳硫汞）中，并將購(gòu)買新色譜柱時(shí)附送的堵頭堵上。儲(chǔ)存的溫度最好是室溫。
文章（文字）來(lái)源：化學(xué)掌中寶。
