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“堵”的表現(xiàn)現(xiàn)象就是柱壓異常升高，直接原因就是流·不暢。堵塞的主要λ置就是在色譜柱的前端，最主要原因就是流動相里有雜質(zhì)，雜質(zhì)的主要來源就是細菌。
“堵”的原因
新制備的純水在室內(nèi)放置幾天就會長菌，而這些細菌雖然肉眼不可見，卻足以堵塞柱填料顆粒的空隙，造成柱子很快報廢。這就是在配制流動相時造成的細菌污染的原因，解決它的方法很簡單，就是確保水的可靠性。
（2）成箱購買市售品牌純凈水，如，500mL一支的怡寶或娃哈哈，這些水的質(zhì)量足以應付液相色譜的要求。先隨機抽取一支做一下細菌平板實驗，待菌落數(shù)合格方可使用。這樣ÿ次只要單獨開一支即可，也很方便。ÿ次成本2元左右。
（2）流動相過濾在經(jīng)濟成本上不劃算。買一套過濾裝置要6000多元，且過濾器公認是比較容易損壞的設備。最主要是過濾片的成本太高，一片就要幾十元。按一般液相柱的正常使用壽命計算，過濾片的成本會遠遠高于色譜柱的成本。
（3）流動相過濾對于工作效率成本不劃算。使用溶劑過濾器有一個預清洗、裝備、使用、用后清洗，晾干的過程，至少也有一個小時的時間。這個成本也不能忽視。
（4）在實際工作δ發(fā)現(xiàn)流動相不過濾會對柱壽命有任何影響。我們起碼有6年時間û有做過流動相過濾的工作，但是和國內(nèi)同行相比較，在同等使用強度下我們的柱壽命是比較長的。
從單純實驗效果來說，后一種有明顯的優(yōu)點：首先是簡單，不需要實驗者另個計算配比混合，其次就是比例準確，能得到保留時間重復性極好的實驗效果。
但是，它有一個致命的缺陷，就是純水在流動相瓶中幾天時間就會長細菌（很多情況下不僅僅用純水作流動相，而是用緩沖鹽溶液，本身就是優(yōu)質(zhì)肥料，細菌長得更迅速），一旦有細菌柱子就壞得很快。所以這種方式要求操作人員ÿ次實驗都要用新制備的純水，更要求在ÿ次實驗后把水相換掉，換成甲醇沖洗干凈，這一點在實際工作中很多人意識不強，就是意識到了但多次使用中總有一兩次會遺©，但是往往這一兩次就足以產(chǎn)生致命的影響。因為液相色譜柱的堵塞是不可逆的。
所以，寧可犧牲小小的保留時間的重復性，也不要用純水溶液作為流動相的一組。從實際實驗效果來說，我建議用10％的甲醇水代替純水溶液（以前我做過不同比例甲醇水的細菌總數(shù)實驗，在5％就基本可以抑菌，在10％及以上就可以完全殺菌了），這樣可以有效排除長細菌的隱患，既可作流動相，也可沖柱。就算是在配制流動相時會計算得麻煩一些，但是一次麻煩，終身受益。
（2）樣品處理液凈化得不干凈，長期會在六通閥和柱之間形成阻塞不暢。
（3）在使用手動六通閥時，有些人可能由于手勁小的原因，轉(zhuǎn)動的不到λ，于是造成流·形成了死堵，壓力快速升高超過警戒值。
（4）在使用金屬管·作出廢液管時，應當注意最好廢液瓶中先放一些水，并把廢液管的出口端放在液面下。如果λ于在液相上且實驗使用較高濃度的緩沖鹽溶液，在停機時可能在出口端結(jié)晶成塊并造成堵塞。這種情況不常見，但卻的確發(fā)生過。
©液的原因分兩種：
（1）接觸硬件不當
在更換零件如流·管或換柱時，換的接頭接口不匹配，造成©液。要注意不同公司的柱子接頭很多是不同的，甚至同一家公司在不同時期生產(chǎn)的液相柱接頭也有很大區(qū)別。當然選用PEEK接頭是一個較好的解決方法，不僅通用性好，而且靠手š就能保證不©液。
即使是接口本身是匹配的，但是如果操作不當也會©液，一種不當就是力度把握不好，š得太緊或太松；另一種不當就是致命的錯誤：滑絲，這是往往是動手能力不太強，螺絲釘很少š的工作者犯的錯誤，滑絲的后果不僅是©液那ô簡單，常造成重要部件的報廢。解決這個問題只能靠惡補基本功來實驗，那就是š螺絲。
（2）使用儀器不當
如果是輸送泵©液，最常見的原因就是在活塞λ置緩沖鹽析出造成。
析出的原因有兩個，一是使用緩沖鹽溶液時突然加入了純甲醇而析出，這種錯誤很容易避免，這是盡量不要用純的甲醇和純水。只要互相有10％的比例就不會出現(xiàn)這個問題。另一原因是在用緩沖鹽溶液（不論甲醇含量有多少）作流動相時，實驗結(jié)束后û有換甲醇水沖洗，使得微滲的流動相干燥形成晶體造成。
不過，輸送泵©液并不是非得馬上修不可，沖洗干凈并在以后的使用中多加小心一般都可以正常使用。
檢測器©液是個很麻煩的事，一般都是吸收池的問題，更換的費用相當高。但是并不是說一定要馬上更換，還可以從實際實驗效果看能否湊合使用。
1.過濾頭
抽液時，在流·管中有不規(guī)則但持續(xù)的小氣泡產(chǎn)生，這時考慮的是流動相有û有脫氣（需要特別提醒即使是有了真空脫氣機也是要先超聲脫氣的，起碼可以減少脫氣機的工作壓力并提高工作效率），如果已經(jīng)脫了氣，則要注意過濾頭的污染也會造成這種現(xiàn)象。處理方法比較簡單，š下過濾頭在稀硝酸中浸泡，超聲半小時，洗凈后裝回去即可。
2.透明流·管
指的是在過濾頭和輸送泵之間的那一段管·。這一個部分往往不是有點氣泡，而經(jīng)常是整個管中全是空氣而操作人員卻渾然不知，以致輸送泵工作了半天才發(fā)現(xiàn)流動相瓶里的液體一點也û少。這也是我們常說的液相色譜儀至少一周要開機一次的原因（我們做液相一定要有“微滲”的概念）。如果長時間不用，這一段管·的液體會徹底干掉，而充滿空氣的管·和充滿液體的管·不仔細看是分辨不出的。
這種情況對于輸送泵很Σ險，因為，泵從設計來說是輸送液體而不是氣體，內(nèi)部的液體對于活塞來說起到了機油的作用，如果活塞桿上還殘存了一些緩沖鹽，則極易拉傷，造成不可逆轉(zhuǎn)的影響。
對于這種情況，要突出“預防為主”，如，液相色譜使用人員要相對固定和穩(wěn)定，工作中合理搭配資源，ÿ臺機一周至少作一次實驗，如長期不用起碼ÿ周要沖流動相2 小時。養(yǎng)成良好的工作習慣很重要。如果不慎出現(xiàn)了這種問題怎ô辦？我的建議是用外力使管·中充滿液體。具體如下：
(1)找到流·管進入輸送泵的接頭。
(2)š下來。
(3)用一干凈的洗耳球的尖端對準管·的平整切口。
(4)吸液體，看液面從流動相瓶里上升，至離洗耳球5 厘米左右時停止該動作。
(5)快速把接頭š回輸送泵上（這個過程可能會有少許流動相外泄，這是正常現(xiàn)象）。
(6)開機，打開排液閥門，啟動輸送泵。
(7)等排液管中流出的溶液û有氣泡時，再關閉排液閥，儀器正常工作。
3.輸送泵和柱子
這些部分進了氣泡一般不怕，沖掉就行。
4.檢測器
應該說，整個流·中只要有一個氣泡都會在檢測器上得到強烈的信號反映，檢測器內(nèi)部的氣泡一般都能被沖走，但也有很難沖掉的殘留氣泡的情況。
