1. 目的
規(guī)范島津LC-20A型高效液相色譜儀的使用。
2. 適用范圍
適用于島津LC-20A型高效液相色譜儀的使用。
3. 適用對象
檢測中心主任，檢測主管，檢測員。
4. 操作規(guī)程
4.1 系統(tǒng)組成
泵：LC-20AT；自動進樣器：SIL-20A；色譜柱柱恒溫箱：CTO-20AS；檢測器：SPD-20A紫外檢測器；RF-10AXL熒光檢測器
4.2 檢測準備
4.2.1制備所需的流動相，有機溶劑用0.45μm的有機濾膜過濾，水溶液用0.45μm的水濾膜過濾，超聲脫氣20min；
4.2.2連接色譜柱：將檢測所需的色譜柱連接到柱溫箱中；
4.2.3配制樣品和標準溶液（也可在平衡系統(tǒng)時配制），用0.45μm針孔式濾膜過濾進1.5mL樣品瓶中；
4.2.4檢查儀器各部件的電源線、數(shù)據(jù)線和輸液管道是否連接正常；
4.2.5將準備好的流動相，依次插入相應的管道。
4.3啟動儀器
4.3.1先啟動電腦，再依次開啟液相色譜檢測儀組件：LC-20AT → CTO-10ASvp → SIL-20A → SPD-20A；
4.3.2雙擊，啟動“LC Solution Launcher”，單擊屏幕左側的“Operation” 標簽，點擊，登陸LC solution 實時分析界面。
4.3.3單擊“LC real time”左側的按鈕。進入System Configuration 模塊，點擊Reset復位，再點擊uto configuration自動配置已連接儀器。
4.4進樣準備
4.4.1設置進樣方法：在實時分析界面的參數(shù)設置版面根據(jù)樣品的需要設置合適的參數(shù)，保存為進樣方法；
4.4.2系統(tǒng)排氣：打開設定好的進樣方法，點擊右上角工具欄中的圖標自動排氣10min，然后點擊工具欄的圖標進行進樣器排氣25min；
4.4.3平衡色譜柱直到基線波動在±0.05mV為止（一般為30min）；
4.4.4將準備好的樣品瓶從編號1開始依次放入105孔樣品架中。
4.5開始進樣
4.5.1單次進樣：點擊按鈕，彈出Single Run（單次運行）對話框，在Method file 中加載已保存的方法文件，在DATA file中鍵入數(shù)據(jù)文件名稱，在sampler中vial#輸入需要進樣的樣品瓶編號，在tray#輸入樣品架編號，在Injection輸入進樣量，點擊OK確定，開始單次進樣；
4.5.2批處理：點擊按鈕，會顯示批進樣列表，在Vial#輸入需要進樣的樣品瓶編號（1、2……），在Tray#輸入樣品架編號1，在Sample Name中輸入樣品名稱，在Sample Type 選擇“Unknown”（未知），在Injection輸入進樣量，在Analysis Type中選擇IT QT作定量定性分析，在Method file 中加載已保存的方法文件，在DATA file中鍵入數(shù)據(jù)文件名稱，點擊OK確定。然后點擊保存方法。點擊，開始批進樣處理。要停止批處理分析，單擊 [批處理] 助手欄中的圖標。
4.6標準曲線的生成：
4.6.1創(chuàng)建數(shù)據(jù)分析參數(shù)：點擊Data Analysis ，進入LC solution 再解析界面，彈出DATA Analysis Parameter對話框，打開標準樣品的液相色譜圖，點擊Wizard，進入數(shù)據(jù)分析向導，設置所需的積分參數(shù)，點擊下一步，在需要的保留時間的峰前面的方框內打√，點擊下一步，選擇標準樣品級別（# of Calib）,點擊下一步，再點擊下一步，在“Conc.”分別從低到高輸入標準樣品的濃度，其余參數(shù)不變，點擊完成。點擊右下角的View，點擊File→Save Method File As,將積分方法文件命名并保存。
4.6.2將數(shù)據(jù)分析應用到原始方法：點擊Batch Processing ，將標準樣品的液相色譜圖拖動到批量處理表中，在Sample Type 中的第一行設為“Standard:(I)”（點擊單元格右下角的箭頭，點擊Standard→Initialize Calibration），下面各行設為“Standard ” (點擊單元格右下角的箭頭，點擊Standard→Add Calibration Level）,在Method File插入克倫特羅積分方法，在Level#分別由標準樣品的濃度從低到高輸入水平級別（1、2……），其余參數(shù)不變，然后點擊批處理助手欄的開始校準；
4.6.3查看標準曲線：點擊助手欄的Calibration,將顯示標準曲線的相關數(shù)據(jù)，若不顯示，則打開生成校準曲線的積分方法文件。
4.7計算樣品濃度：
在LC Solution再解析版面，創(chuàng)建批處理表，將未知樣品的液相色譜圖拖至批處理表中，將Sample Type 全部設為“Unknown”，Method File全部插入保存的積分方法，Level#全部設為“0”，其余參數(shù)不變，然后點擊批處理助手欄的，進行樣品進行定量計算。雙擊樣品的結果文件將看到所測樣品在標準曲線的位置，點擊右下角的Compound Table View中的“Result”，濃度顯示在“Conc.”中。
4.8儀器關閉
4.8.1打開LC Solution 實時分析界面，沖洗管路20min，沖洗完畢后，點擊工具欄的“Shutdown”圖標，退出系統(tǒng)，然后按順序依次關閉液相色譜檢測儀組件電源：SPD-20A→SIL-20A→CTO-10ASvp→LC-20AT；
4.8.2關閉電腦，斷開電源。
5注意事項：
5.1流動相必須要超聲脫氣20～30min，通過適當?shù)臑V膜過濾；
5.2水相必須要當天制備，放置太久的水可能會長菌，從而導致管路堵塞；
5.3進樣器在進樣的時候，不要打開自動進樣器的門；
5.4檢測完畢后，用甲醇沖洗管道20min，以免有樣品在管路和柱子殘留；
5.5關閉儀器的時候，必須先退出系統(tǒng)，聽到“嗶”一聲之后，才能依次關閉儀器組件的電源；
5.6若長期不啟動儀器，要將管道充滿甲醇，卸下柱子，封住端口，以免柱子內的有機溶劑揮發(fā)掉而使柱子失效。