在生物體內(nèi)膽甾醇從乙酰輔酶A生物合成。三分子乙酰CoA（C2）縮合，經(jīng)由乙酰乙酰CoA（C4）而成為3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A，它的硫酯基被還原而生成甲羥戊酸（C6）。由于甲羥戊酸的磷酸化和隨后發(fā)生的脫羧和脫水而生成異戊烯焦磷酸（C5）和二甲基丙烯焦磷酸（C5）。后二者，順次結(jié)合而生成牻牛兒醇焦磷酸（C10）。繼而變成法尼焦磷酸（C15），二分子法尼焦磷酸結(jié)合而成〔角〕鯊烯（squalene）（C30），〔角〕鯊烯氧化性閉環(huán)成為羊毛甾醇（C30）。最后，在羊毛甾醇的4和14位上的3個(gè)甲基脫掉，Δ24的雙鍵飽和以及Δ8雙鍵向Δ6位移動(dòng)而得到膽甾醇。結(jié)果膽甾醇的27個(gè)碳原子都是來自醋酸（15個(gè)來自醋酸的甲基碳素，12個(gè)來自羧基碳素）。幾乎所有的組織都可從醋酸合成膽甾醇。參與膽甾醇合成的酶都含于微粒體中，細(xì)胞的可溶性部分存在著促進(jìn)因子，C28及C29甾體生物合成最初也經(jīng)歷著和膽甾醇一樣的途徑，形成甾體核，以后，在側(cè)鏈24位上引入來自蛋氨酸甲基的碳原子。