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貯存液 |
貯存溫度 |
反應(yīng)濃度 |
反應(yīng)緩沖液 |
溫度 |
預(yù)處理 |
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0.01mol/l tris(ph7.8) |
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鏈霉蛋白酶a |
20mg/ml |
-20℃（溶于水） |
1mg/ml |
0.01mol/l edta |
37℃ |
自消化b |
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0.5% sds |
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0.01mol/l tris(ph7.8) |
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蛋白酶kc |
20mg/ml |
-20℃（溶于水） |
50μg/ml |
0.005mol/l edta |
37～56℃ |
無(wú)須預(yù)處理 |
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0.5% sds |
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a：鏈霉蛋白酶是從鏈球菌（streptomyces griseus）中分離到的一種絲氨酸酶和酸性蛋白酶的混合物。
b：自消化可消除dna酶和rna酶的污染，經(jīng)自消化的鏈酶蛋白酶的配制方法如下：把該酶的粉末溶解于10mmol./l tris·hcl(ph7.5)、10mmol/l nacl中，配成20mg/ml濃度，于37℃溫育1h。經(jīng)消化的鏈霉蛋白酶分裝成小份放在密封試管中，保存-20℃。
c：蛋白酶k是一種枯草蛋白酶類的高活性蛋白酶，從林伯氏白色念球菌（tritirachium album limber）中純化得到。該酶有兩個(gè)ca2 結(jié)合位點(diǎn)，它們離酶的活性中心有一定距離，與催化機(jī)理并無(wú)直接關(guān)系。然而，如果從該酶中除去ca2 ，由于出現(xiàn)遠(yuǎn)程的結(jié)構(gòu)變化，催化活性將喪失80%左右，但其剩余活性通常已足以降解在一般情況下污染酸制品的蛋白質(zhì)。所以，蛋白酶k消化過(guò)程中通常加入edta（以抑制依賴于mg2 的核酸酶的作用）。但是，如果要消化對(duì)蛋白酶k具有較強(qiáng)耐性的蛋白，如角蛋白一類，則可能需要使用含有1mmol/l ca2 而不含edta的緩沖液。在消化完畢后、純化核酸前要加入egt（ph8.0）至終濃度為2mmol/l,以鰲合ca2 。
