1 抽取腹水
選擇接種后7－10d健康較好的動(dòng)物，頸椎脫臼，固定于蠟板上，腹部皮膚消毒后，剪開(kāi)并剝?nèi)ジ共科つw，用空針穿過(guò)腹部肌肉，抽吸腹水，放入無(wú)菌容器內(nèi)，置冰塊保存。若用幾只動(dòng)物供瘤時(shí)，應(yīng)將腹水混合。另取小量腹水，置于加有肝素的干試管內(nèi)，作為觀察細(xì)胞形態(tài)及細(xì)胞計(jì)數(shù)用。將空針中剩余的腹水，滴一滴于載玻片上，推片，瑞氏染色，鏡下進(jìn)行細(xì)胞分類計(jì)數(shù)，其中瘤細(xì)胞數(shù)應(yīng)≥95%。
抽出之腹水應(yīng)為乳白色之濃稠液體，若為黃色或有大量紅細(xì)胞數(shù)應(yīng)棄去。
2 細(xì)胞計(jì)數(shù)
取置于肝素管內(nèi)的細(xì)胞。用生理鹽水稀釋10倍及100倍；取稀釋液0.9mL，加臺(tái)盼藍(lán)(0.2%臺(tái)盼藍(lán)生理鹽水液)0.1mL，混勻。用白細(xì)胞計(jì)數(shù)法計(jì)瘤細(xì)胞總數(shù)。同時(shí)計(jì)算受感染的死細(xì)胞數(shù)。因瘤細(xì)胞死后，細(xì)胞膜的通透性改變，細(xì)胞可被臺(tái)盼藍(lán)染成藍(lán)色。
3 接種
腹水用無(wú)菌含葡萄糖的平衡鹽水(如Hanks氏液、Gey氏液、洛氏液、Earle氏液等)稀釋至適當(dāng)?shù)臐舛�，作腹腔注射，每鼠注�?.1－0.2mL。整個(gè)操作應(yīng)在60min內(nèi)完成。
一般在試驗(yàn)結(jié)束后次日稱體重，逐日記錄。對(duì)照組動(dòng)物通常在2－3周內(nèi)全部死光，個(gè)別存活時(shí)間太長(zhǎng)者需剔除，但各組亦應(yīng)相應(yīng)地剔除一只。如試驗(yàn)期間對(duì)照組動(dòng)物于7d內(nèi)死亡≥20%，表示試驗(yàn)失敗。如對(duì)照組內(nèi)20%動(dòng)物存活4周以上，實(shí)驗(yàn)亦應(yīng)作廢，受試物組觀察時(shí)間一般為60d(生存超過(guò)此時(shí)限者，仍按60d計(jì)算)。分別記錄對(duì)照組和受試物組的平均生存時(shí)間�！ �
白血病株的接種腹水型白血病如L1210及P388的接種同腹水型腫瘤接種法。L615小白鼠白血病的接種則按下述方法進(jìn)行。取L615白血病小白鼠(約接種后第6d)，頸椎脫臼，在無(wú)菌條件下，剪取脾臟一小塊(約米粒大小)，放置玻璃組織勻漿器內(nèi)，加少量無(wú)菌生理鹽水，制成細(xì)胞懸液，并稀釋至8－9mL，取一定量加0.2%臺(tái)盼藍(lán)緩沖液，計(jì)每毫升懸液的活細(xì)胞數(shù)(臺(tái)盼藍(lán)終濃度為0.02%)。根據(jù)活細(xì)胞數(shù)值適當(dāng)稀釋?xiě)乙簩⒓?xì)胞數(shù)調(diào)整至4×107/mL，接種于小鼠皮下，每鼠接種細(xì)胞懸液0.1－0.2mL。