一、DNA聚合酶或Klenow大片段介導(dǎo)的原位缺口平移（ISNT）
1．切片常規(guī)脫蠟，梯度乙醇復(fù)水化。
2．將切片組織浸入2×SSC液中，80℃，20min，然后蒸餾水沖盡。
3．0.5％胃蛋白酶（pH2.0）37℃消化0～20min，PBS洗盡。
4．用濾紙擦干組織塊周邊液體放入濕盒組織切片上滴加緩沖液A，5min。緩沖液A：50mmol/L Tris-HCl, 5mmol/L MgCl2, 10mmol/L β-巰基乙醇，0.005％BSA，pH7.5。
5．棄去緩沖液A，滴加標(biāo)記液約50μl，25℃溫育1h。標(biāo)記反應(yīng)液：0.005mmol/L dNTP, 0.005mol/L biotin-16-dUTP, 25U/ml Klenow大片段。
6．PBS漂洗2次，各3min。
7．內(nèi)源酶阻斷劑阻斷15min。
8．PBS洗2次，各3min。
9．滴加HRP-avidin覆蓋組織，室溫下30min。
10．PBS洗2次，各3min。
11．DAB-H2O2顯色約5min。
12．流水沖洗后，蘇木素復(fù)染1min。常規(guī)脫水，透明，封片。
13．陰性對照片在第5步改加不含Klenow的標(biāo)記液，余同。
二、TdT介導(dǎo)的dUTP缺口末端標(biāo)記技術(shù)（TUNEL）
1．切片常規(guī)脫蠟，復(fù)水，后續(xù)過程在濕盒內(nèi)進行。
2．3％的H2O2阻斷內(nèi)源性辣根過氧化物酶30min。
3．0.15mol/L的PBS洗2次，每次5min。
4．切片浸泡在2×SSC 80℃ 20min。
5．0.15mol/L的PBS洗2次，每次5min。
6．蛋白酶K或胃蛋白酶消化0～20min。
7．0.15mol/L的PBS洗2次，每次5min。
8．TdT緩沖液孵育10min。
9．TdT反應(yīng)液37℃孵育1h。
10． 切片浸泡在2×SSC溶液10min，以終止反應(yīng)。
11． 0.15mol/L的PBS洗2次，每次5min。
12． 鏈卵白素標(biāo)記的辣根過氧化物酶孵育30min。
13． 0.15mol/L的PBS洗2次，每次5min。
14． 0.04％的DAB顯色5～10min，鏡下控制時間。
15． 蘇木素復(fù)染3～5min，常規(guī)復(fù)水，透明和封片。