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今日分享內(nèi)容：脂肪酸和反式脂肪酸檢測(cè)常見(jiàn)問(wèn)題解答
《GB 5009.168-2016 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中脂肪酸的測(cè)定》
《GB 5009.257-2016 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中反式脂肪酸的測(cè)定》
一、《GB 5009.168-2016 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中脂肪酸的測(cè)定》
01
脂肪酸甲酯和脂肪酸甘油三酯標(biāo)準(zhǔn)品如何選擇？
國(guó)標(biāo)《GB 5009.168-2016 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中脂肪酸的測(cè)定》按照定量方法分為三個(gè)方法，分別是內(nèi)標(biāo)法、外標(biāo)法和歸一化法。內(nèi)標(biāo)法需要使用37種脂肪酸甲酯混標(biāo)作為定性外標(biāo)，十一碳酸甘油三酯作為定量內(nèi)標(biāo)；外標(biāo)法需要使用相應(yīng)的脂肪酸甘油三酯作為定量外標(biāo)；歸一化法需要使用37種脂肪酸甲酯混標(biāo)作為定性外標(biāo)。
02
37種脂肪酸甲酯混標(biāo)如何使用，
內(nèi)標(biāo)法如何配置標(biāo)準(zhǔn)曲線？
從國(guó)標(biāo)GB 5009.168-2016的截圖，可以看出，內(nèi)標(biāo)法需要配置5mg/mL十一碳酸甘油三酯的內(nèi)標(biāo)溶液；而混合脂肪酸甲酯標(biāo)液不需要配置標(biāo)準(zhǔn)曲線，僅用于定性和脂肪酸甲酯響應(yīng)因子的計(jì)算。
如果選購(gòu)37種脂肪酸甲酯混合標(biāo)液（不同濃度于異辛烷，總計(jì)10 mg/mL），建議取1.0mL 混合標(biāo)液稀釋至5mL或10mL，得到總計(jì)2mg/mL或1mg/mL的37種脂肪酸甲酯混合標(biāo)準(zhǔn)使用液。
脂肪酸甲酯混標(biāo)的作用主要是用來(lái)計(jì)算脂肪酸甲酯相對(duì)十一碳酸甲酯的響應(yīng)因子，因此進(jìn)樣單點(diǎn)的標(biāo)準(zhǔn)溶液即可；樣品中脂肪酸甲酯的含量計(jì)算主要取決于樣品中添加的十一碳酸甲酯內(nèi)標(biāo)的含量和樣品中各脂肪酸甲酯的峰面積及其響應(yīng)因子。樣品中脂肪酸的含量需要由脂肪酸甲酯的含量再乘以轉(zhuǎn)換系數(shù)得到。
03
使用CD-2560進(jìn)樣37種脂肪酸甲酯為什么只出了36個(gè)峰？
不同品牌、不同規(guī)格的色譜柱，色譜柱污染、柱效下降的色譜柱都可能導(dǎo)致37種脂肪酸的分離有所變化，建議可通過(guò)調(diào)整流速等參數(shù)優(yōu)化色譜條件，以達(dá)到最優(yōu)分離度。
建議先在0.8mL/min 的流速條件下查看目標(biāo)峰的分離情況，根據(jù)出峰情況，如果是31號(hào)和32號(hào)峰分離變差就增加流速，如果是24號(hào)峰、30號(hào)峰和35號(hào)峰分離變差就減小流速，通過(guò)流速的微調(diào)以找到最優(yōu)的分離條件。具體調(diào)整方法可查看安譜實(shí)驗(yàn)相關(guān)的單頁(yè)“37種脂肪酸甲酯分離的小秘密，你知道嗎？”。
04
外標(biāo)法檢測(cè)有哪些需要注意？
外標(biāo)法使用脂肪酸甘油三酯作為標(biāo)準(zhǔn)品，但需要將脂肪酸甘油三酯標(biāo)準(zhǔn)溶液經(jīng)過(guò)酯交換轉(zhuǎn)變?yōu)橹舅峒柞ド蠙C(jī)檢測(cè)，不可直接將脂肪酸甘油三酯直接上機(jī)檢測(cè)，也不可使用脂肪酸甲酯作為外標(biāo)進(jìn)行定量計(jì)算。
外標(biāo)法是直接計(jì)算樣品中脂肪酸的含量，不需要計(jì)算脂肪酸甲酯的含量。通過(guò)脂肪酸甘油三酯的單點(diǎn)外標(biāo)法進(jìn)行計(jì)算，計(jì)算結(jié)果主要與脂肪酸甘油三酯標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度、脂肪酸甲酯的峰面積和脂肪酸甘油三酯轉(zhuǎn)化為脂肪酸的系數(shù)有關(guān)。脂肪酸甘油三酯標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度的選擇可根據(jù)實(shí)際樣品中脂肪酸的含量進(jìn)行優(yōu)化調(diào)整，使其盡量接近樣品中含量。
二、《GB 5009.257-2016 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中反式脂肪酸的測(cè)定》
01
要檢測(cè)哪些反式脂肪酸，標(biāo)準(zhǔn)品怎么選擇？
標(biāo)準(zhǔn)要求檢測(cè)食品中C16:1t~C22:1t等16種反式脂肪酸。具體目標(biāo)物信息可參見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)附錄A中的“表A.1 脂肪酸甲酯化學(xué)信息表”。
針對(duì)標(biāo)準(zhǔn)要求的反式脂肪酸，推薦的標(biāo)準(zhǔn)品選擇見(jiàn)下表，分別是6種反式單不飽和脂肪酸甲酯、4種十八碳二烯酸甲酯、8種十八碳三烯酸甲酯。
02
反式脂肪酸標(biāo)品的使用有些什么注意點(diǎn)？
上述推薦的3種反式脂肪酸標(biāo)準(zhǔn)品中十八碳二烯酸甲酯和十八碳三烯酸甲酯均為同分異構(gòu)體混合物形式，均無(wú)準(zhǔn)確濃度，這是反式脂肪酸的性質(zhì)及其生產(chǎn)工藝導(dǎo)致，但這并不影響結(jié)果的計(jì)算，因?yàn)闃?biāo)準(zhǔn)中反式脂肪酸的定量方法是面積歸一化法，并不需要確定某一個(gè)反式脂肪酸的準(zhǔn)確濃度，此標(biāo)準(zhǔn)品更重要的作用是目標(biāo)物的定性。
4種十八碳二烯酸甲酯混標(biāo)和8種十八碳三烯酸甲酯混標(biāo)中的目標(biāo)物信息見(jiàn)下表，可以看出2個(gè)混標(biāo)中分別含有順-9,12-十八碳二烯酸甲酯（亞油酸甲酯）和順-9,12,15-十八碳三烯酸甲酯（亞麻酸甲酯）這兩種順式脂肪酸甲酯。因此推薦的3種混標(biāo)產(chǎn)品中總共含有18個(gè)目標(biāo)物。
03
檢測(cè)食品中反式脂肪酸
還需要檢測(cè)其他常見(jiàn)脂肪酸嗎？
檢測(cè)食品中的反式脂肪酸需要同時(shí)檢測(cè)其他順式脂肪酸，反式脂肪酸的定量計(jì)算是使用歸一化法，從公式可以看出需要計(jì)算樣品中所有脂肪酸甲酯目標(biāo)物的校準(zhǔn)峰面積。通常建議可以和《GB 5009.168-2016 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中脂肪酸的測(cè)定》同時(shí)檢測(cè)，因此檢測(cè)食品中反式脂肪酸還需要采購(gòu)37種脂肪酸甲酯混標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)。
需要注意的是“GB 5009.168-2016”和“GB 5009.257-2016”兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)中脂肪酸的歸一化法的計(jì)算公式是并不一樣，在實(shí)際檢測(cè)過(guò)程中需要分別參照標(biāo)準(zhǔn)要求的公式進(jìn)行計(jì)算。
04
標(biāo)準(zhǔn)品中有一些脂肪酸甲酯的CAS號(hào)和標(biāo)準(zhǔn)不一樣？
因不飽和脂肪酸甲酯存在順?lè)串悩?gòu)，以及順?lè)次镔|(zhì)的混合物，因此可能設(shè)計(jì)多個(gè)CAS號(hào)，所以需要對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品的CAS號(hào)信息特別注意。特別是“GB 5009.257-2016”中的CAS號(hào)信息情況，詳見(jiàn)下表，而在“GB 5009.168-2016”中目標(biāo)物的CAS號(hào)信息均正確無(wú)誤，各位老師可以結(jié)合“GB 5009.168-2016”進(jìn)行目標(biāo)物CAS號(hào)信息的確認(rèn)。
05
有一些反式脂肪酸和順式脂肪酸分離度較差怎么優(yōu)化？
在脂肪酸檢測(cè)過(guò)程中常常遇到的一個(gè)問(wèn)題是，順式脂肪酸 C18:3 6c,9c,12c 和一些反式十八碳三烯酸為同分異構(gòu)體，且在色譜柱上出峰時(shí)間完成重合，無(wú)法分離，這樣就會(huì)導(dǎo)致如果樣品中有出峰，則無(wú)法判定該目標(biāo)物是反式和順的結(jié)構(gòu)，影響結(jié)果判定。
