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許多從事分析的朋友，尤其是運用色譜分離的實驗室工作人員，多數(shù)認為氣相色譜上手快，操作簡單，但是到了方法開發(fā)時卻不知道該從何下手了，今天小編就給大家捋一捋氣相色譜方法開發(fā)的一般步驟。
出現(xiàn)嚴重的峰拖尾現(xiàn)象怎么辦？首先檢查儀器中的隔墊、襯管和分流平板是否被污染；其次檢查色譜柱安裝是否正確，是否存在泄漏現(xiàn)象，確認色譜柱柱端是否切割平整；若峰拖尾現(xiàn)象仍無明顯改善，選擇更換色譜柱柱效較好的色譜柱；若更換后峰拖尾現(xiàn)象無明顯改善，嘗試其他不同類型色譜柱。
出現(xiàn)嚴重的峰前伸現(xiàn)象怎么辦？首先確認是否為色譜柱過載，調(diào)整進樣量或者重新配制新；也可以嘗試適當增加分流比。
一套完整的分析方法開發(fā)流程是怎樣的呢？做好下面三個步驟：
1、方法開發(fā)前信息確認；
2、色譜柱篩選；
3、方法確認與驗證。
1 方法開發(fā)前信息確認
1、確認GC分析方法開發(fā)目的；
2、確認樣品的狀態(tài)：中控反應(yīng)液、純度樣品、溶殘；
3、確認樣品的物理和化學性質(zhì)：溶解性和穩(wěn)定性等。
一般適合使用氣相分析方法檢測的樣品：樣品可揮發(fā)；熱穩(wěn)定性好；分子量小于500；沸點一般不超過300℃；在液相中幾乎無響應(yīng)；大部分含有四元環(huán)、五元環(huán)和六元環(huán)結(jié)構(gòu)，部分橋環(huán)螺環(huán)結(jié)構(gòu)。
注意：當化合物為鹽酸鹽時需要進行游離后進樣。
2 樣品來源與與處理方法
氣相色譜能直接分析的樣品必須是氣體或液體，固體樣品分析前應(yīng)溶解在適當溶劑中，且保證樣品不含氣相不能分析的組分（如無機鹽）或可能會損壞色譜柱的成分。
所以當我們接到一個未知樣品時必須先了解其來源，從而估計樣品可能含有的組分以及沸點范圍。如果能確定樣品可以直接分析，那問題就簡單多了。只需要找一種合適的溶劑，比如丙酮、氯仿、己烷與苯等氣相色譜常見的溶劑。
一般來說溶劑應(yīng)該具有較低的沸點，從而使其容易與樣品分離。盡可能避免用水、二氯甲烷和甲醇做溶劑，因為他們對延長色譜柱的使用壽命不利。另外毛細管色譜柱分析時，樣品濃度不能太高，否則會造成柱超載，通常樣品濃度為mg/ml或者更低。
如果樣品中有不能直接用氣相色譜分析的組分，或者樣品濃度過低，就必須采取一些預(yù)處理手段，包括萃取、濃縮、提純等。
3 確定儀器配置
確定儀器配置就是確定方法所需要的進樣裝置、載氣、色譜柱與檢測器。比如測定氣體揮發(fā)性成分就需要頂空進樣器，測定痕量有機氯就需要ECD檢測器。
而色譜柱的選擇則是這其中的重中之重，毛細管色譜柱的固定相分為極性、非極性、中等極性與PLOT等。
4 GC色譜柱篩選
一般我們載氣常用氮氣，由于條件限制很多實驗室無法使用其他氣體，所以GC方法開發(fā)核心在色譜柱篩選上，色譜柱篩選思路如下：
氣相色譜常用色譜柱
色譜柱篩選過程中關(guān)注以下幾個因素：
1.峰形
1.峰形
判斷標準：峰型良好，沒有嚴重的峰前伸和峰拖尾現(xiàn)象。
出現(xiàn)嚴重的峰拖尾現(xiàn)象怎么辦？首先檢查儀器中的隔墊、襯管和分流平板是否被污染；其次檢查色譜柱安裝是否正確，是否存在泄漏現(xiàn)象，確認色譜柱柱端是否切割平整；若峰拖尾現(xiàn)象仍無明顯改善，選擇更換色譜柱柱效較好的色譜柱；若更換后峰拖尾現(xiàn)象無明顯改善，嘗試其他不同類型色譜柱。
出現(xiàn)嚴重的峰前伸現(xiàn)象怎么辦？首先確認是否為色譜柱過載，調(diào)整進樣量或者重新配制新；也可以嘗試適當增加分流比。
2.峰高
根據(jù)峰高確認合適的樣品濃度以及良好的靈敏度。GC樣品濃度一般為10-100mg/mL，峰高在1000-6000；“樣品濃度”不僅指樣品配制濃度，而是指進入色譜柱后分離進入檢測器的濃度。
根據(jù)峰高確認合適的樣品濃度以及良好的靈敏度。GC樣品濃度一般為10-100mg/mL，峰高在1000-6000；“樣品濃度”不僅指樣品配制濃度，而是指進入色譜柱后分離進入檢測器的濃度。
若靈敏度較差，可以改善以下參數(shù)：
-
提高進樣濃度，若提高后靈敏度仍然很差，考慮更換色譜柱和檢測方法；
-
降低分流比（分流比不能太低）；
-
提高汽化效率（降低汽化分流歧視效應(yīng)）。
3.保留時間
定義：從進樣開始到某個組分的色譜頂點的時間間隔稱為該組分的保留時間。
若保留時間出現(xiàn)漂移，檢測氣體流速是否正常；檢查升溫程序是否正常；檢查色譜柱是否被污染；檢查隔墊和色譜柱的連接處是否由泄漏；檢查是否用錯稀釋劑；檢查分流管路是否堵塞；檢查色譜柱規(guī)格是否發(fā)生變換。
4.分離度
4.分離度
當分離度（R）＞1.5時，滿足檢測要求。當分離度（R）＜1.5時，嘗試在原有體系里調(diào)整梯度進行分離。若嘗試調(diào)整梯度，R＜1.5，考慮換其他類型色譜柱和檢測方法。
5 分析方法確認
一般新開發(fā)的分析方法不需要驗證全部項目，主要關(guān)注：專屬性、回收率、靈敏度（檢測限）、溶液穩(wěn)定性幾個因素。一般這幾個指標符合要求，分析方法一般都能通過方法驗證。
6 分離條件優(yōu)化
這是一個很大的課題，當儀器配置與樣品確定之后，技術(shù)人員主要做的條件優(yōu)化工作一般是改變柱溫與載氣流速，直至調(diào)整色譜柱類型，以達到最好的分離效果，柱溫比載氣流速對分離效果的影響更大。
此外，通過保留指數(shù)與GC/MS的方法可以給未知組分定性，常用的內(nèi)標法與外標法給待測物質(zhì)定量。
此外，通過保留指數(shù)與GC/MS的方法可以給未知組分定性，常用的內(nèi)標法與外標法給待測物質(zhì)定量。
