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實驗一線操作,微生物檢測過程中的問題

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2020-04-13  來源:食品微生物檢驗公眾號
核心提示:1.微生物實驗過程中使用的移液槍怎么滅菌?答:移液槍用紗布包好,外面報紙包好滅菌。不能濕熱滅菌的槍,在槍口處塞入少許棉花,
 1.微生物實驗過程中使用的移液槍怎么滅菌?

答:移液槍用紗布包好,外面報紙包好滅菌。不能濕熱滅菌的槍,在槍口處塞入少許棉花,外面采用表面滅菌的方法擦拭滅菌,里面采用熱空氣交換法或者潔凈空氣交換法處理。

 

2.微生物實驗過程中如果移液槍槍頭想要重復使用怎么辦?

答:槍頭盒裝好,報紙包好滅菌。槍頭少的話放入平皿或者小燒杯后,報紙包好滅菌。

 

3. 微生物實驗回收率上下限是多少?

答:50—200%(藥典規(guī)定)。

 

4. 滅菌后的物品怎么保存,幾天內(nèi)可以繼續(xù)使用?

答:移液管、平皿之類的工器具沒打開放無菌室一般可以放置兩個星期左右。滅菌后的培養(yǎng)基放冰箱冷藏保存通?煞乓恍瞧。

 

5.GB4789.10-2016金黃色葡萄球菌檢驗中培養(yǎng)時間很多都改成了24-48h ,這個跨度有點大,具體怎么判定?

答:如果培養(yǎng)24h后已經(jīng)長菌就不需要再進行培養(yǎng)了;如果培養(yǎng)24h后未長菌則需要繼續(xù)培養(yǎng)至48h。

 

6.請教食品車間人員手部微生物檢測的具體方法?

答:①被檢人員雙手五指并攏,用浸濕生理鹽水的脫脂棉在手指曲面,從指尖、指溝處到指端來回涂抹2次(一只手涂抹面積約30平方厘米)。
②將脫脂棉放到10ml滅菌生理鹽水采樣管內(nèi),蓋緊試管,詳細標記取樣點和取樣時間。
③將取好的樣品送到檢測,由檢測員將每只樣試管振打80次或用混勻器充分混勻,取1ml樣液,放入滅菌平皿內(nèi),傾注營養(yǎng)瓊脂,每個樣品平行接種兩塊平皿,同時接種一個空白樣,在平皿上詳細標記取樣點和取樣時間。
④將采樣后的平皿在35-37℃條件下培養(yǎng)48±2小時后取出查看結果,計數(shù)平板上的細菌菌落數(shù);(將采樣后的平皿在27-29℃條件下培養(yǎng)5-7天后取出查看結果,計數(shù)平板上的霉菌菌落數(shù))。

具體可參照標準 GB 15979-2002。

 

7.培養(yǎng)皿上用記號筆寫的字,用酒精擦完還有殘留的顏色咋辦?

 答:有二個辦法:一,棉球做成小球球(和醫(yī)生擦的那種大小)然后泡酒精里,用時候少量多次。這樣殘痕少。第二個辦法:買點去污粉,先統(tǒng)一找塊抹布蘸去污粉把字先擦拭掉,然后再去統(tǒng)一擦拭去污粉,然后清水洗凈。

 

8.微生物一般默認是不用做回收率,感覺是約定俗成的了,但是為什么呢?有時候會有做化學的朋友問我,但是又沒有一個特別好的解釋。大家有沒有很權威的或者理論支持很強的理由呢?

答:應該是因為微生物分布的不均勻性吧,另外微生物會生長繁殖,也是重要的影響因素啊;食品行業(yè)沒有強制要求而已;制藥行業(yè)微生物檢驗方法驗證是要求做回收率的,詳見《中國藥典》2015年版四部通則與《中國藥品檢驗標準操作規(guī)范》2010年版中“微生物限度檢查”有關內(nèi)容。

 

9.內(nèi)審時,專家提出高壓滅菌器的滅菌時間沒有校準,可是,當?shù)氐氖∮嬃吭河嬃扛邏簻缇鲿r依據(jù)的標準只需要對溫度和壓力進行校準,沒有時間項目,這個該如何整改?  

答:這里提供一個可行性方案:增加秒表,操作員進行秒表與滅菌器進行校準書寫記錄,每年對秒表進行校準。

 

10.一般在超凈工作臺里開紫外燈,然后把玻璃門關下。如果不能穿透玻璃,是不是在超凈工作臺外還要在開一個紫外燈滅菌?

答:紫外線是不能穿透玻璃的,因為紫外線波長短,能量不高,穿透能力比較弱,只能做表面的殺菌,且作用有效距離只有1.5米;紫外線是不能穿透玻璃的,超凈工作臺外還要在開一個紫外燈滅菌。

 

11.車間生產(chǎn)一鍋洗潔精(菌落總數(shù)檢驗方法按GB4789.2),生產(chǎn)完(產(chǎn)品中添加防腐劑)立即取樣檢驗菌落總數(shù)結果是300cfu/g,隔一天后重新取樣菌落總數(shù)是<10CFU/g,取樣時間不同結果差距這么大,是因為防腐劑將菌落抑制殺死了嗎,還是檢驗操作出現(xiàn)問題了?有時候感覺微生物檢驗不確定因素太多了,比如同一個罐里同時取的原料(兩個平行樣),同時檢驗得出的結果差距很大,一個有檢出一個沒檢出菌落,都不知道到底有沒有被污染?
答:微生物不同其他的項目,比如一些理化指標,只要攪拌均勻了,數(shù)據(jù)的分布也是很均勻的,不會因取樣的位置變化而發(fā)生大的變化,但微生物就不一樣了,本來產(chǎn)品里面存在就少,還分布不均勻,而且樣品還經(jīng)過了稀釋,所以加入到培養(yǎng)基里面的試液是否含菌就很難說。
比如即使你取的樣品里面取到了含菌的部分,但最后做實驗的時候卻只是抽樣的一小部分,并且又經(jīng)過生理鹽水的稀釋,然后再從這個稀釋液里面取1ml去培養(yǎng),那這1ml里面能抽到菌體的可能性是多大呢?如果剛好抽到一個,那培養(yǎng)之后就是一個菌落。防腐劑一般不殺菌。只有抑菌作用。

 

12.無菌室有霉菌了,怎么除掉?采用施特白熏蒸后還是有霉菌,怎么辦?

答:一般選擇進行熏蒸和除濕,采用施特白季銨鹽還沒有氯有效,建議采用過氧乙酸熏蒸,并在熏蒸時把無菌室風機關上,熏蒸完,靜置30分鐘再打開風機排棄。

 

13.審核老師提出高壓蒸汽滅菌鍋需要考壓力容器作業(yè)證去哪報名?

答:市場監(jiān)管局或質(zhì)量技術監(jiān)督局的特種設備管理科室。

 

14.哪些奶粉需要檢測阪崎腸桿菌?

答:一般一段奶粉都需要,為保證其質(zhì)量,與其相關原輔料,包材以及與奶粉接觸的均需要,當然包括奶粉量勺。依據(jù)GB10765-2010。

 

15.食品大腸菌群檢測,依照現(xiàn)在的國標用什么培養(yǎng)基檢測。啃枰M行復發(fā)酵實驗嗎?

答:MPN法所用培養(yǎng)基為:初發(fā)酵為LST,復發(fā)酵是BGLB。平板計數(shù)法所用培養(yǎng)基為VRBA和BGLB。

 

16.新版本的8538中的嚴格厭氧菌應該使用那種呢,用雙歧桿菌是否可以呢,請教各位老師們!

答:可以用雙歧桿菌。

 

17.有人做過GB/T18204.4-2013公共用品用具的微生物檢測嗎,國標寫“公共場所用品用具每件用品采集2份樣“,因為是物品不同部位采集兩份,那么做菌落、金葡等檢測是兩份樣品都要用檢液測平行,還是隨機抽一份樣品做菌落平行,另一份樣品做其他項目?因為公共用品用具要做菌落、大腸、金葡、溶血鏈球、真菌,如果兩份樣都做同一項目平行樣品顯然不夠用,而且工作量大,還有該檢測大腸菌群用多少檢樣導入乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基,一定要10ml檢液嗎?另外想問問公共衛(wèi)生的致病菌金葡與溶血性鏈球菌的標準菌株是買什么編號,第幾代的菌做陽性對照實驗?請幫忙解答下,非常感謝!

答:兩份不同部位隸屬于同一樣品,合二為一實驗處理;是的大腸菌群檢液10ml;標準菌株編號參照GB 4789.28,工作菌株采用3、4代為宜。

 

18.菌落總數(shù)等檢測項目用的稀釋液:225ml生理鹽水,這個時候的用的“生理鹽水”算培養(yǎng)基嗎? 如何做質(zhì)量驗收?GB 4789.28《培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量要求》 中也沒有提到。

答:生理鹽水算自制培養(yǎng)基,要做配制記錄,但是驗收只做供應商和感官就好。把生理鹽水作為一種檢測用試劑,使用前填寫配制記錄、滅菌記錄,沒有質(zhì)量驗收一說,也可以。

 

19.微生物培養(yǎng)箱需要定期消毒嗎?若消毒,消毒頻率如何定?用哪種消毒方式?

答:①需要消毒。
②頻率自行規(guī)定,我們要求每周,有文件規(guī)定。
③可以用濕毛巾擦定后,再用一塊干燥的軟毛巾擦干,再噴灑75%的酒精。

編輯:songjiajie2010

 
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