19世紀末，一位英國醫(yī)生使用雞蛋作為生物指示劑，以雞蛋的凝固來判定滅菌效果，首次從概念上引入了生物指示劑。1955年，美國國立衛(wèi)生研究院（National Institutes of Health, NIH）使用嗜熱脂肪芽孢桿菌制備生物指示劑，因為該菌無致病性、無熱原、無毒，而且對壓力蒸汽的抵抗力在所有微生物中最強。

1957年，美國AMSOO公司在芝加哥的一次全美醫(yī)院協(xié)會上首先推薦市售商品化的生物指示劑。1965年美國藥典就提到已知微生物芽孢，1975年以后比較詳細論述了生物指示劑的有關(guān)參數(shù)。我國衛(wèi)生部也制訂了生物指示劑的有關(guān)法規(guī)。

在美國藥典中生物指示劑被定義為一種對特定的滅菌程序有確定的、穩(wěn)定的耐受性的特殊微生物制成品。
生物指示劑分類：

1）按結(jié)構(gòu)分可分為片狀生物指示劑(strip biological indicator)和自含式生物指示劑(self-contained biological indicator)；片狀生物指示劑需要使用陽性對照和陰性對照，而自含式生物指示劑只需要陽性對照即可 。

2）根據(jù)ISO 11138-1(2017)的分類，目前的生物指示劑有環(huán)氧乙烷滅菌用生物指示物、濕熱滅菌用生物指示物、干熱滅菌用生物指示物、過氧化氫低溫等離子滅菌生物指示物和甲醛滅菌用生物指示物 。

3）按培養(yǎng)時間可分為通用型生物指示劑和快速型生物指示劑。通用型生物指示劑根據(jù)芽孢復蘇后指示菌種新陳代謝引起培養(yǎng)液pH值改變，通過酸堿指示劑變色來進行判讀，時間一般在24或48小時以上；而快速型生物指示劑根據(jù)芽孢復蘇后的酶促反應(yīng)，通過熒光進行判讀，時間一般為3-4小時。同時國外正在研發(fā)更加快速的生物指示劑，有望在1小時之內(nèi)得出結(jié)果。

生物指示劑的應(yīng)用貫穿了滅菌工藝驗證的整個流程。滅菌工藝驗證包含了滅菌工藝開發(fā)和滅菌程序確認兩大部分。目前，常用生物指示劑進行生物監(jiān)測指征。

由于生物指示劑能夠直觀反應(yīng)微生物在經(jīng)歷滅菌過程后的存活程度，生物指示劑的應(yīng)用并不局限于滅菌監(jiān)測。

生物指示劑可應(yīng)用于對滅菌設(shè)備進行性能確證的輔助工作中以及特定物品的滅菌工藝研發(fā)以及建立工作中。

生物指示劑可應(yīng)用于終包裝或終容器內(nèi)產(chǎn)品的滅菌工藝驗證，同樣可應(yīng)用于無菌過程中使用的滅菌設(shè)備、材料和包材組分滅菌工藝驗證。

生物指標也可用于已驗證滅菌程序的定期再驗證。生物指示劑還用于隔離器和無菌潔凈室滅菌工藝的驗證評估。

生物指示劑有2 項主要性能： 孢子數(shù)量和以D值表征的對滅菌工藝的抗性。

美國藥典要求生物指示劑生產(chǎn)廠家應(yīng)能提供效期內(nèi)的微生物總數(shù)數(shù)值、D值及D值測定方法等相關(guān)信息。生物指示劑使用者在應(yīng)用前能夠?qū)γ渴褂脝挝坏钠骄�菌落�?shù)進行測定、對生物指示劑D值進行評估。

1.在生物指示劑標簽上注明滅菌器鍋號，負荷數(shù)量，滅菌日期；不要在指示劑的瓶或蓋上另貼一個標簽。將生物指示劑放于一個標準測試包內(nèi)，并置于最難滅菌的位置。

2.將含有生物指示劑的測試包放在滅菌器最難滅菌的位置，通常是滅菌器底層，近門或排氣口上面。

3.正常裝載。

4.滅菌循環(huán)完畢，取出生物指示劑。

5.滅菌結(jié)束后，從滅菌器內(nèi)取出含有生物指示劑的測試包，打開散熱5分鐘后才能取出生物指示劑。同時在壓碎安瓿之前，讓生物指示劑在培養(yǎng)鍋外再冷卻10分鐘后才能壓碎，然后進行生物培養(yǎng)。

6.檢查生物指示劑標簽上的化學指示劑，顏色由玫瑰色變成棕色證明生物指示劑經(jīng)過壓力蒸汽滅菌過程的處理。該顏色的變化并非表明該處理達到滅菌的目的，如果化學指示劑沒有變化，請檢查滅菌過程。

7.戴上防護眼鏡，擠碎安瓿，然后培養(yǎng)生物指示劑。

8.每次培養(yǎng)須同時培養(yǎng)一個未滅菌過的生物指示劑進行陽性對照，陽性對照生物指示劑與經(jīng)過滅菌處理的生物指示劑為相同生產(chǎn)日期和批號。