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一、微生物檢測意識
樹立正確的無菌觀念和檢測人員的素質(zhì)，是每一個(gè)微生物檢測人員應(yīng)具備的素質(zhì)，好的修養(yǎng)素質(zhì)和積極的工作態(tài)度是保證結(jié)果準(zhǔn)確的基礎(chǔ)，下面的規(guī)定規(guī)范都是為檢測服務(wù)的，如果檢測人員沒有好的素質(zhì)，這些規(guī)定都是虛設(shè)，擺設(shè)；希望下面的規(guī)范是每位檢測人員想要做得，而不是強(qiáng)加在自己身上的緊箍咒。
①增強(qiáng)自己得生物安全意識，如何保護(hù)自己，如何保護(hù)樣品，如何無菌操作，有責(zé)任心。
②實(shí)驗(yàn)原理，實(shí)驗(yàn)原理是實(shí)驗(yàn)的精髓，掌握它，就能夠?qū)φ麄�(gè)實(shí)驗(yàn)更好的了解深入，學(xué)習(xí)研究。
③實(shí)驗(yàn)條件的把握，對實(shí)驗(yàn)的每個(gè)條件是否掌握清楚，實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵控制點(diǎn)是否清楚。
④實(shí)驗(yàn)結(jié)果的把握，一個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的出現(xiàn)，首先應(yīng)該自我分析，并且具備這種分析能力，對異常如何處理或是進(jìn)一步驗(yàn)證。
⑤具備研究好學(xué)心態(tài)，檢測工作是一個(gè)相對只是含量較高的職業(yè)，高科技飛速發(fā)展的今天，許多當(dāng)時(shí)的先進(jìn)技術(shù)不久就陳舊落后，檢測工作也一樣，優(yōu)秀的化驗(yàn)員總是虛心好學(xué)，善于研究，總是處在科技的前沿。
⑥人員素質(zhì)，積極向上，樂于助人，對工作負(fù)責(zé)，工作第一等，努力提高自己的工作質(zhì)量。
二、微生物檢測
1.實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備
1.1無菌間
無菌間是微生物實(shí)驗(yàn)的重要環(huán)節(jié)，關(guān)系到實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，無菌間的使用規(guī)范要嚴(yán)格要求，保證實(shí)驗(yàn)環(huán)境影響因素降到最低。
使用要求：
1、無菌間在使用前，必須先進(jìn)行清理、臭氧殺菌時(shí)間50min或紫外燈殺菌30min。
2、檢測使用的器皿、樣品等物品的進(jìn)出，通過緩沖窗進(jìn)行傳遞，使用完畢后紫外燈殺菌30min，開傳遞窗時(shí)禁止兩邊同時(shí)打開。
3、檢測人員進(jìn)入緩沖間后，先更換拖鞋、佩帶無菌帽和一次性口罩，更換衣服，并將其擺放整齊，方可進(jìn)入無菌間。
4、進(jìn)入無菌室過程中，依次打開和關(guān)閉各緩沖間的門，以避免空氣流通帶入外界的雜菌。
5、無菌操作前必須使用75%酒精對手部進(jìn)行消毒，接種有害菌種時(shí)必須戴手套。
6、進(jìn)行接種所用的吸管，平皿及培養(yǎng)基等必須經(jīng)嚴(yán)格消毒滅菌，打開包裝未使用完的器皿，不能放置后再使用，金屬用具應(yīng)高壓滅菌或用95%酒精點(diǎn)燃燒灼后使用，剪刀、鑷子至少每周進(jìn)行一次高壓滅菌。
7、從包裝中取出吸管時(shí)，吸管尖部不能觸及外露部位，使用吸管接種于試管或平皿時(shí)，吸管尖不得觸及試管或平皿邊。
8、接種樣品、轉(zhuǎn)種細(xì)菌必須在酒精燈前操作，接種細(xì)菌或樣品時(shí)，吸管從包裝中取出后及打開試管塞都要通過火焰消毒。
9、接種環(huán)或針在接種細(xì)菌前應(yīng)經(jīng)火焰燒灼全部金屬絲，必要時(shí)還要燒到環(huán)和針與桿的連接處，接種結(jié)核菌和烈性菌的接種環(huán)應(yīng)在沸水中煮沸5min，再經(jīng)火焰燒灼。
10、吸管吸取菌液或樣品時(shí)，應(yīng)用相應(yīng)的橡皮頭吸取，不得直接用口吸。
11、檢驗(yàn)結(jié)束后，所有帶菌的培養(yǎng)基、試劑、稀釋液和器皿必須盡快清理出無菌間滅菌洗刷。
12、檢驗(yàn)結(jié)束后，人員離開無菌間前，須將無菌間的衛(wèi)生徹底清理、并用紫外燈進(jìn)行殺菌。
13、無菌間所用工器具（剪刀、鑷子、膠頭、涂抹棒、托盤盒等）使用完畢后，擺放整齊。
14、滅菌后的無菌間懸掛“已滅菌”標(biāo)識，正在使用的無菌間要懸掛“使用中”標(biāo)識。防止檢測人員在未經(jīng)過滅菌的無菌間中進(jìn)行微生物檢測。
其它注意事項(xiàng)：
1. 禁止在無菌間內(nèi)打手機(jī)，由于業(yè)務(wù)需要可在緩沖間內(nèi)打手機(jī)。
2. 實(shí)驗(yàn)過程中穿著整齊，不要出現(xiàn)露頭發(fā)、鼻孔等現(xiàn)象，禁止在無菌間打鬧、喧嘩。
3. 實(shí)驗(yàn)過程中，物品要擺放整齊，實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生的垃圾要單獨(dú)存放不要亂放，防止污染實(shí)驗(yàn)樣品。
4. 紫外燈每周五打掃衛(wèi)生時(shí)要用酒精棉球擦拭，防止灰塵阻擋影響殺菌效果。
1.2實(shí)驗(yàn)器具
實(shí)驗(yàn)器具是微生物實(shí)驗(yàn)的一個(gè)關(guān)鍵控制點(diǎn)，實(shí)驗(yàn)器具的無菌是保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確的重要因素。
①培養(yǎng)皿，首先應(yīng)確認(rèn)是否經(jīng)過消毒，確認(rèn)后進(jìn)行外觀檢查，觀察是否有破損，有破損處廢棄。滅過菌的平皿最多保存一周時(shí)間。打開的平皿整齊的擺放到實(shí)驗(yàn)臺上備用，發(fā)現(xiàn)有破裂的平皿應(yīng)廢棄；使用時(shí)看是否有平皿內(nèi)部存有雜質(zhì)、培養(yǎng)基等異物也應(yīng)立即廢棄。
②玻璃器皿，新購置玻璃器具因含有游離堿，應(yīng)在清潔液或2%鹽酸內(nèi)浸泡24小時(shí)，再用蒸餾水清洗。檢驗(yàn)沾染的油跡、污濁物等器具可用10%NaOH浸泡1小時(shí)后，用清水沖洗干凈。每周洗刷盛生理鹽水的三角瓶子，防止水垢太厚影響滅菌和微生物生長。
③實(shí)驗(yàn)完畢后，使用的實(shí)驗(yàn)器具應(yīng)立即清洗消毒，防止微生物增長污染或者傷害到人員。所有衛(wèi)生用具如拖把、掃帚、抹布、垃圾桶等都要根據(jù)污染區(qū)、清潔區(qū)、無菌區(qū)要求嚴(yán)格區(qū)分開、并專用，不得相互混淆，衛(wèi)生用具每周定量用1：20次氯酸鈉液消毒浸泡、清洗、涼干，以免污染。
④在進(jìn)行各種檢驗(yàn)時(shí)，應(yīng)避免污染；遇有場地、工作服等污染時(shí)，應(yīng)立即處理，防止細(xì)菌擴(kuò)散以免造成污染。凡吸過菌液的吸管或滴管或染菌的培養(yǎng)皿，應(yīng)立即放入盛有消毒液的容器內(nèi)或高壓滅菌處理。工作人員必須每天堅(jiān)持做好環(huán)境衛(wèi)生工作，防止灰塵飛揚(yáng)，定期對整個(gè)操作環(huán)境進(jìn)行消毒。
1.3藥品的使用
微生物藥品是微生物實(shí)驗(yàn)的一個(gè)關(guān)鍵控制點(diǎn)，培養(yǎng)基質(zhì)量的關(guān)系到檢測結(jié)果準(zhǔn)確的重要因素。
①藥品的采購，實(shí)驗(yàn)藥品缺少時(shí)，由藥品管理員上計(jì)劃。微生物藥品常規(guī)藥品按“箱”進(jìn)行計(jì)算，不常用藥品按“瓶”進(jìn)行計(jì)算，生化鑒定管按“支”進(jìn)行計(jì)算，每種保留至少1個(gè)單位庫存量。
②藥品取用，藥品取用時(shí)到藥品管理員取鑰匙，取用后將藥品柜鎖死，并將鑰匙歸還給藥品管理員。取用人員發(fā)現(xiàn)藥品低于1個(gè)單位庫量時(shí)，及時(shí)通知藥品管理員。
③將近過期藥品（2個(gè)月），生化鑒定管可以退貨，其他藥品抓緊時(shí)間使用，過期藥品廢除。
④新藥品使用時(shí)，應(yīng)注意檢查包裝是否有破損？粉末狀藥品是否有結(jié)塊？有無雜質(zhì)？有無變色等異常。
⑤藥品稱量按照使用要求配制，并填寫藥品配制記錄。
⑥配制好的藥品按照滅菌要求進(jìn)行，含糖的培養(yǎng)基滅菌總時(shí)間不超過45min，滅菌后觀察培養(yǎng)基的顏色、容量等，并搖勻培養(yǎng)基，放置瓊脂沉淀到底部。
⑦培養(yǎng)基使用前，按要求進(jìn)行溶解，在溶解過程中要防止二次污染和溶解不充分；溶解后放到45~50度，放置備用時(shí)間不超過4h。
⑧使用時(shí)，進(jìn)行冷卻溫度控制到45度左右，過高容易殺死微生物，過低培養(yǎng)基凝固。
⑨傾倒培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)注意無菌操作，并搖勻培養(yǎng)基。傾倒過多，培養(yǎng)基過厚需氧環(huán)境不好，過薄培養(yǎng)基容易干裂影響檢測結(jié)果，配制培養(yǎng)基盡可能按照樣品量進(jìn)行配制，使用后的培養(yǎng)基根據(jù)情況廢棄或保存。
1.4滅菌鍋的使用
滅菌鍋屬于高壓滅菌容器，安全性和滅菌效果是控制的重點(diǎn)，使用規(guī)范如下：
安全事項(xiàng)：由于滅菌鍋屬高壓容器，壓力表要及時(shí)計(jì)量，操作過程中人員不得離開現(xiàn)場，如有異常問題及時(shí)通知相關(guān)人員，機(jī)修，管道。
①檢查高壓滅菌鍋的外觀是否正常，壓力表、溫度計(jì)是否歸零，各管路閥門是否為關(guān)閉狀態(tài)。
②排放物品，注意不要過滿；關(guān)鍋并將標(biāo)示牌轉(zhuǎn)到已滅菌，調(diào)節(jié)閥打到排氣狀態(tài)。
③打開總閥門，打開排水法，進(jìn)行管道排水，約1-2min當(dāng)聽到無水聲時(shí)，關(guān)閉排水法。
④打開進(jìn)氣閥和出氣閥，進(jìn)行排氣，此過程是對鍋內(nèi)空氣進(jìn)行排氣，防止空氣存在影響滅菌效果。
⑤排氣等夾層壓力達(dá)到0.5Mpa，將調(diào)節(jié)閥調(diào)到滅菌狀態(tài)進(jìn)行滅菌，培養(yǎng)基121℃15min；其他特殊培養(yǎng)基安滅菌要求進(jìn)行滅菌。注意事項(xiàng)由于溫度為手控，所以滅菌過程中要注意溫度的變化。
⑥滅菌完畢后，填寫滅菌記錄，并關(guān)閉進(jìn)氣閥，排氣閥不用關(guān)閉，并等溫度降低60度左右，壓力降到0；如果壓力過大時(shí)開鍋有可能打不開，另一個(gè)容易造成液體倒吸使瓶塞蹦出。
⑦開鍋后，及時(shí)將培養(yǎng)基取出搖勻后冷卻，物品取出后負(fù)責(zé)人要及時(shí)清鍋，防止其他物品污染滅菌物品。
⑧滅菌結(jié)束后，將排水閥打開，防止管道積水。
其他注意事項(xiàng)：
①溫度計(jì)無變化：1.溫度計(jì)損壞，2.電源未打開，3.探針堵塞，4.調(diào)節(jié)閥損壞不進(jìn)氣。
②鍋門打不開：1.壓力過大，2.調(diào)節(jié)閥損壞，內(nèi)部負(fù)壓。
③管道漏氣：找管道維修。
④滅菌鍋的每周清潔污物及凝結(jié)水同時(shí)清洗；滅菌鍋要保持干凈并無殘留物（尤其濾器）以防止生銹保證最大熱傳遞和橡膠用具以蒸沸15min滅菌為宜，高溫高壓處理易失去彈性。
⑤容積控制：采取稱中法測定蒸發(fā)量，體積100vml稀釋起重量為101vg，高壓夠體積偏差不超過1%。
1.5培養(yǎng)箱的使用
培養(yǎng)箱的溫度、濕度控制是微生物控制的關(guān)鍵點(diǎn)。使用規(guī)范如下：
①外觀檢查，有無噪音，是否放平穩(wěn)，有無故障。
②檢查溫度設(shè)置是否為檢測要求溫度？顯示溫度與設(shè)定溫度是否在允許波動范圍內(nèi)。
③為了保持培養(yǎng)箱內(nèi)部濕度，可在培養(yǎng)箱內(nèi)放一個(gè)盛水的小燒杯，防止培養(yǎng)基干燥。
④培養(yǎng)箱內(nèi)物品擺放整齊，但不要過緊密，防止溫度，空氣等環(huán)境之間的差異對檢測結(jié)果的影響，并關(guān)好箱門（輕開輕關(guān)）。
⑤每天對培養(yǎng)箱內(nèi)溫度計(jì)和顯示溫度進(jìn)行比較，填寫儀器設(shè)備使用記錄，對較大差異的查找原因進(jìn)行處理。
⑥保持好培養(yǎng)箱內(nèi)衛(wèi)生，對有異味的培養(yǎng)箱進(jìn)行通氣，并每周對培養(yǎng)箱進(jìn)行消毒殺菌,培養(yǎng)后的平皿及時(shí)清理，防止霉菌或其他微生物累積。
⑦冰箱每周進(jìn)行除霜清理，存放的物品做好記錄，對不用的物品及時(shí)清理。
三、樣品接收
2.1送檢樣品的處理
微生物接受樣品，就是檢驗(yàn)工作開始之時(shí)，樣品接收、交接環(huán)節(jié)是檢驗(yàn)工作的第一環(huán)節(jié)，關(guān)系到檢驗(yàn)工作質(zhì)量和效率。
為了真實(shí)的反應(yīng)車間加工產(chǎn)品的質(zhì)量情況，正確的指導(dǎo)車間生產(chǎn)。具體措施如下：
化驗(yàn)員到車間自取樣品，保證每個(gè)車間每周1個(gè)樣品，并在化驗(yàn)結(jié)果后備注“自取”。另外有特殊情況可增加取樣量，微生物考核時(shí)按正常樣品計(jì)算，在自取樣品欄里填寫。
2.2樣品運(yùn)輸
個(gè)人車間樣品由自己取，便于與車間交流溝通，掌握產(chǎn)品信息和工藝，對微生物檢測判斷有幫助。微生物樣品運(yùn)輸過程中必須采用保溫袋，防止溫度變化；另外運(yùn)輸過程中樣品不要落地，防止袋子破損污染樣品。
2.3樣品保存
冷凍品按要求進(jìn)行解凍，干燥食品可放在常溫冷暗處，易腐和冷卻樣品應(yīng)放入10℃環(huán)境。冷凍樣品來不及檢驗(yàn)應(yīng)放入-15℃以下冰箱內(nèi)。
原則上冷凍樣品取出后，按包裝原樣在室溫下自然解凍；也可在0-4℃環(huán)境解凍，時(shí)間不超過18小時(shí)；也可在溫度不超過45℃環(huán)境中解凍，時(shí)間不超過15min。
2.4樣品制備
根據(jù)樣品不同性狀、類型的食品，進(jìn)行適當(dāng)處理，盡可能的保證均勻取樣�；虬凑諜z測方法進(jìn)行樣品處理。
四、日常工作
4.1文件資料及物品的規(guī)定
為了規(guī)范微生物資料管理，起到工作有秩序的目的，防止重要資料丟失。特對資料整理規(guī)定如下，希望大家嚴(yán)格執(zhí)行，為我們創(chuàng)造一個(gè)良好的工作環(huán)境。
4.1.1個(gè)人桌面
1.原始記錄夾子要有對應(yīng)車間的標(biāo)簽，沒有的可向組長索要打印一張，不要出現(xiàn)標(biāo)簽與內(nèi)容不符的現(xiàn)象。
2.個(gè)人資料必須放到夾子里面，不要在桌面出現(xiàn)裝訂紙張。
3.原始記錄、抽取單不要隨意亂放，防止客戶參觀時(shí)隨意翻看，泄漏客戶機(jī)密，記錄完畢后，要整齊放到辦公室夾子座里面。
4. 其它資料包括書籍等要放到小柜里，借閱、歸還時(shí)要到資料管理員簽字，借閱的書籍也不要亂放，看完后要整齊放在辦公室桌子，禁止放到實(shí)驗(yàn)區(qū)（可在實(shí)驗(yàn)區(qū)閱讀）。
5. 有單頁報(bào)告單或者其他資料時(shí)，可放到插頁夾子里，每組一個(gè)，桌面不要出現(xiàn)單頁紙。
4.2電子文檔
1.電腦不允許下載歌曲游戲等。
2. 建立的新表格無用處時(shí)立即刪除。
3.提供客戶報(bào)表要存到相應(yīng)的文件夾，防止文件丟失，并對提供文件標(biāo)黃底
4. 不可隨意改動報(bào)表，尤其是匯總結(jié)果時(shí)禁止在車間報(bào)表上直接改動。
5. 每月結(jié)束后，設(shè)備管理員負(fù)責(zé)進(jìn)行數(shù)據(jù)拷貝留存。
